Method Article

在鸡胚神经诱导的含量为

DOI:

10.3791/1027

⸱

February 13th, 2009

 , 
1Institute of Biosciences and Technology, Center for Environmental and Genetic Medicine, Texas A&M University (TAMU)

In This Article

Summary

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神经诱导是在大脑形成的第一步。它是一种机制，使恒胜的节点（组织者），指示相邻的组织采用了神经的命运，即会引起神经系统。本视频演示了在鸡胚神经诱导实验。

Abstract

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鸡胚是一个有价值的工具，在早期胚胎发育的研究。其透明度，可获得性和易于操纵，使其为研究神经系统的形成和最初的图案的理想工具。本视频演示了如何移植到主机组织者组织，恒胜小号节点的方法是，（在鸡胚的组织者）被嫁接到一个主机主管外胚层。主办移植指示覆NA已经组织采取通过神经诱导信号的神经命运。这一机制被称为神经诱导，并构成了脊椎动物的大脑和脊髓的形成初始步骤。这种方法实质上是公认的在小鸡的神经诱导分子的特性。本视频演示了在神经诱导实验的不同步骤，首先，德纳胚胎explanted和寄托一道菜。然后，主机胚胎准备为新的文化。移植是切除和移植到主机领域的透明带保证金。主机是培养18-22小时。大会是固定的，为进一步应用（例如原位杂交）处理。这种方法最初设计由沃丁顿

Protocol

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一，原理概述:

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本视频演示了在不同的步骤检测在鸡胚神经诱导。首先，主机的胚胎是explanted在新的文化[NI1]。然后，德纳胚胎是在生理盐水和恒胜的节点（在鸡的"组织者"）explanted与荧光染料DII标记[NI2]。恒胜的节点是从德纳胚胎切除[NI3]和主机的胚胎移植到[NI4，NI5]。主机的胚胎，然后长达22小时，培养后，期间德纳组织诱导异位轴在主机领域opaca [NI6]。 [网联科技]以下文化，主机胚胎是固定的，民建联存在的光氧化处理:通过这种化学反应，德纳源性细胞，FITC荧光下出现红色光氧化[NI7前，变成褐色与民建联以下反应。原位杂交胚胎处理与神经标记[网联科技];主机派生组织已形成存在德纳移植神经组织。这个组织显示为蓝色。

1:准备新的文化的主机的胚胎

  1. 这一神经诱导实验协议，已培养汉堡和汉密尔顿第3阶段的鸡蛋开始 +（或HH3） 。这些鸡蛋已经奠定了他们一边在一个潮湿的孵化器孵育13小时。
  2. 准....

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Discussion

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本视频演示了不同的步骤执行检测神经诱导，这种检测基本上是公认的在小鸡的神经诱导分子的特性，因此可以使用一个广泛的应用， 范围从胚胎 micromanipulations 1-4，; 6日至揭开新的信号级联反应，7,8，所有旨在了解初步形成大脑和神经系统的其余步骤。

....

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Acknowledgements

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DP是从国家药物滥用研究所露丝Kirschstein奖1F32 DA021977 - 01A1收件人。这项工作是支持的玛格丽特M. Alkek基金会RHF。

....

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
鸡蛋动物Charles River LaboratoriesPremium 受精，HH3+（14 小时）
立体显微镜徕卡显微系统MZ9.5 或类似
产品 杂交培养箱设备Robbins Scientific，SciGeneM1000与倒置的 Pyrex 培养皿和 500 ml ddH2O 烧杯
Marsh 一起使用自动培养设备LyonRX
Pyrex 培养皿
Watchmaker's 玻璃 50 毫米工具VWR 国际66112-060
玻璃环工具物理工厂 设施切割 4 毫米厚的玻璃管部分（外径 27 毫米，内径 25 毫米）。不要精细抛光。
弯曲镊子 （1）工具电子显微镜科学72991-4C
镊子 （2）工具精细科学工具11002-13钝端使用磨刀石和 100 微米矿物油
精细剪刀工具精细科学工具14161-10
塑料盘工具Falcon BD353001
橡胶灯泡工具电子显微镜科学70980
DiI试剂InvitrogenD-282
吸气管组件工具Sigma-AldrichA5177-5EA
Micr–lectrode 拉拔器设备Sutter Instrument Co.Sutter InstrumentsP-97 火焰/棕色微量移液器
巴斯德毛细移液器工具电子显微镜科学70950-12圆边火焰下
培养室工具Pioneer Plastics030C
微量毛细管工具Sigma-AldrichP1049-1PAK
显微解剖刀工具精细科学工具10056-12用于在原位杂交前穿刺空腔
细针 直径 0.2mm 工具精细科学工具26002-20混合 1 份固化剂，9 份 基础;设定 O/N 在 37C
焦碳酸二乙酯 （depc）试剂电子显微镜科学15710
Sylgard 184 硅弹性体固化剂和基础道康宁0001986475混合 1 份固化剂，9 份 碱;在 37C 设定 O/N
碳酸二乙酯 （depc）Acros Organics10025025将 1ml depc 加入 1l PBS 中;摇动;高压灭菌
16% PFA电子显微镜科学15710
显微镜 管 焦器

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Waddington, C. H. Experiments on the development of chick and duck embryos, cultivated in vitro. Phil. Trans. R. Soc. Lond. B. 221, 179-230 (1932).
  2. Waddington, C. H. Induction by the primitive streak and its derivatives in the chick. J. Exp. Biol

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