Mesure Caenorhabditis elegans sur des milieux solides
Summary
Dans cet article nous présentons un protocole général pour la mesure de la durée de vie des nématodes maintenu sur un support solide avec UV-tué alimentaire bactérienne.
Abstract
Le vieillissement est un processus dégénératif caractérisé par une détérioration progressive des composants cellulaires et des organites résultant de la mortalité. Le nématode<em> Caenorhabditis elegans</em> A émergé comme un modèle principal utilisé pour étudier la biologie du vieillissement. Parce que pratiquement tous les sous-systèmes biologiques subit un déclin fonctionnel avec l'âge, la durée de vie est le critère principal d'intérêt lorsque l'on considère le taux total de vieillissement. Dans les nématodes, la durée de vie est généralement défini comme le nombre de jours d'un animal reste sensible aux stimuli extérieurs. Les nématodes peuvent être propagés soit dans des milieux liquides ou sur des supports solides en plaques, et les techniques ont été développées pour mesurer la durée de vie dans les deux conditions. Nous présentons ici un protocole généralisé pour mesurer la durée de vie des nématodes maintenue sur milieu solide croissance des nématodes et nourris avec un régime d'UV-tué les bactéries. Ces procédures peuvent être facilement adaptés à la durée de vie de dosage dans différentes conditions communes, y compris un régime alimentaire composé de bactéries vivantes, des restrictions alimentaires, et l'interférence ARN.
Protocol
Discussion
Le contrôle génétique de la longévité a été largement étudié en C. elegans, largement dû à la facilité et la rapidité avec laquelle la durée de vie peut être déterminée. Le protocole abordées dans cet article décrit un cadre de base pour obtenir des données reproductibles durée de vie en C. elegans et peut également être appliquée à des espèces relatednematode. 2 En faisant quelques simples modifications de ces procédures peuvent être adaptés pour mesurer la dur?…
Acknowledgements
Ce travail a été soutenu par une Percées Glenn / Afar en gérontologie et le Prix des subventions du NIH 1R01AG031108-01 à MKGS est soutenu par le NIH bourse de formation P30AG013280. MK est une Ellison Medical Foundation New Scholar liés au vieillissement.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Agar | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0145-17-0 (214530) | |
| Ampicillin | Reagent | MidSci | 0339 | |
| BactoTryptone | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0123-17-3 (211705) | |
| BactoPeptone | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0118-17-0 (211677) | |
| CaCl2 | Reagent | Fisher Scientific (JT Baker) | NC9699248 (1332-01) | |
| Carbenicillin | Reagent | Gold BioTechnology (GBT) | C0109 | |
| Cholesterol | Reagent | Sigma-Aldrich | C75209 | |
| Fluorodeoxyuridine (FUDR) | Reagent | Sigma-Aldrich | F0503 | |
| Isopropyl β-d-Thiogalactopyranoside (IPTG) | Reagent | Gold BioTechnology (GBT) | I2481C5 | |
| KPi Dibasic | Reagent | Fisher Scientific (JT Baker) | 5087862 (3252-01) | |
| KPi Monobasic | Reagent | Fisher Scientific (JT Baker) | 5087861 (3246-01) | |
| MgSO4 | Reagent | Fisher Scientific (JT Baker) | NC9561800 (2500-01) | |
| NaCl | Reagent | Fisher Scientific | S251 | |
| Tris | Reagent | Sigma-Aldrich | T1503 | |
| Yeast Extract | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0886-17-0 (288620) |
References
- Wood, W. B., Wood, W. B. . The Nematode Caenorhabditis elegans. , 1-16 (1988).
- Sutphin, G. L., Kaeberlein, M. Dietary restriction by bacterial deprivation increases life span in wild-derived nematodes. Exp Gerontol. 43, 130-135 (2008).
- Garigan, D. Genetic analysis of tissue aging in Caenorhabditis elegans: a role for heat-shock factor and bacterial proliferation. 遗传学. 161, 1101-1112 (2002).
- Chen, D., Pan, K. Z., Palter, J. E., Kapahi, P. Longevity determined by developmental arrest genes in Caenorhabditis elegans. Aging Cell. 6, 525-523 (2007).
- Curran, S. P., Ruvkun, G. Lifespan regulation by evolutionarily conserved genes essential for viability. PLoS Genet. 3, e56-e56 (2007).
- Dillin, A. Rates of behavior and aging specified by mitochondrial function during development. Science. 298, 2398-2401 (2002).
- Hamilton, B. A systematic RNAi screen for longevity genes in C. elegans. Genes Dev. 19, 1544-1555 (2005).
- Hansen, M., Hsu, A. L., Dillin, A., Kenyon, C. New genes tied to endocrine, metabolic, and dietary regulation of lifespan from a Caenorhabditis elegans genomic RNAi screen. PLoS Genet. 1, 119-128 (2005).
- Lee, S. S. A systematic RNAi screen identifies a critical role for mitochondria in C. elegans longevity. Nat Genet. 33, 40-48 (2003).
- Smith, E. D. Age- and calorie-independent life span extension from dietary restriction by bacterial deprivation in Caenorhabditis elegans. BMC Dev Biol. 8, 49-49 (2008).
- Hodgkin, J., Horvitz, H. R., Brenner, S. Nondisjunction Mutants of the Nematode CAENORHABDITIS ELEGANS. 遗传学. 91, 67-94 (1979).
- Emmons, S. W., Sternberg, P. W., Riddle, D. L., Blumenthal, T., Meyer, B. J., Priess, J. R. . C. ELEGANS II. , (1997).
- Lipton, J., Kleemann, G., Ghosh, R., Lints, R., Emmons, S. W. Mate searching in Caenorhabditis elegans: a genetic model for sex drive in a simple invertebrate. J Neurosci. 24, 7427-7434 (2004).
- Davis, B. O., Anderson, G. L., Dusenbery, D. B. Total luminescence spectroscopy of fluorescence changes during aging in Caenorhabditis elegans. 生物化学. 21, 4089-4095 (1982).
- Klass, M. R. Aging in the nematode Caenorhabditis elegans: major biological and environmental factors influencing life span. Mech Ageing Dev. 6, 413-429 (1977).
- Steinkraus, K. A. Dietary restriction suppresses proteotoxicity and enhances longevity by an hsf-1-dependent mechanism in Caenorhabditis elegans. Aging Cell. 7, 394-404 (2008).
