Medição Caenorhabditis elegans Expectativa de Vida em meios sólidos
Summary
Neste artigo apresentamos um protocolo geral para medir a expectativa de vida dos nematóides mantidos em meios sólidos com alimentos UV-morto bacteriana.
Abstract
O envelhecimento é um processo degenerativo caracterizado por uma deterioração progressiva de componentes celulares e organelas, resultando em mortalidade. O nematóide<em> Caenorhabditis elegans</em> Surgiu como um modelo principal utilizado para estudar a biologia do envelhecimento. Porque praticamente todos os subsistemas biológico sofre declínio funcional com o aumento da idade, expectativa de vida é o objetivo primário de interesse quando se considera taxa total de envelhecimento. Em nematóides, expectativa de vida é normalmente definida como o número de dias de um animal continua a responder a estímulos externos. Nematóides podem ser propagadas tanto em meios líquidos ou em meios sólidos em placas, e as técnicas foram desenvolvidas para medir o tempo de vida em ambas as condições. Aqui apresentamos um protocolo generalizada para medir tempo de vida dos nematóides mantidos em meio de crescimento sólido de nematóides e alimentados com uma dieta de UV-morto bactérias. Estes procedimentos podem ser facilmente adaptado a vida útil do ensaio sob várias condições comuns, incluindo uma dieta composta de bactérias vivas, a restrição alimentar e interferência de RNA.
Protocol
Discussion
O controle genético da longevidade tem sido estudado extensivamente em C. elegans, em grande parte devido à facilidade e rapidez com que expectativa de vida pode ser determinada. O protocolo discutido neste artigo descreve uma estrutura básica para a obtenção de dados de vida reprodutíveis extensão em C. elegans e também pode ser aplicado às espécies relatednematode. 2 Ao fazer algumas alterações simples desses procedimentos pode ser adaptado para medir a expectativa de vida sob …
Acknowledgements
Este trabalho foi financiado por um Avanços Glenn / AFAR em Gerontologia e Grant Award NIH 1R01AG031108-01 a MKGS é suportado pelo NIH treinamento conceder P30AG013280. MK é um Ellison Medical Foundation Scholar novo no Envelhecimento.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Agar | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0145-17-0 (214530) | |
| Ampicillin | Reagent | MidSci | 0339 | |
| BactoTryptone | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0123-17-3 (211705) | |
| BactoPeptone | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0118-17-0 (211677) | |
| CaCl2 | Reagent | Fisher Scientific (JT Baker) | NC9699248 (1332-01) | |
| Carbenicillin | Reagent | Gold BioTechnology (GBT) | C0109 | |
| Cholesterol | Reagent | Sigma-Aldrich | C75209 | |
| Fluorodeoxyuridine (FUDR) | Reagent | Sigma-Aldrich | F0503 | |
| Isopropyl β-d-Thiogalactopyranoside (IPTG) | Reagent | Gold BioTechnology (GBT) | I2481C5 | |
| KPi Dibasic | Reagent | Fisher Scientific (JT Baker) | 5087862 (3252-01) | |
| KPi Monobasic | Reagent | Fisher Scientific (JT Baker) | 5087861 (3246-01) | |
| MgSO4 | Reagent | Fisher Scientific (JT Baker) | NC9561800 (2500-01) | |
| NaCl | Reagent | Fisher Scientific | S251 | |
| Tris | Reagent | Sigma-Aldrich | T1503 | |
| Yeast Extract | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0886-17-0 (288620) |
References
- Wood, W. B., Wood, W. B. . The Nematode Caenorhabditis elegans. , 1-16 (1988).
- Sutphin, G. L., Kaeberlein, M. Dietary restriction by bacterial deprivation increases life span in wild-derived nematodes. Exp Gerontol. 43, 130-135 (2008).
- Garigan, D. Genetic analysis of tissue aging in Caenorhabditis elegans: a role for heat-shock factor and bacterial proliferation. 遗传学. 161, 1101-1112 (2002).
- Chen, D., Pan, K. Z., Palter, J. E., Kapahi, P. Longevity determined by developmental arrest genes in Caenorhabditis elegans. Aging Cell. 6, 525-523 (2007).
- Curran, S. P., Ruvkun, G. Lifespan regulation by evolutionarily conserved genes essential for viability. PLoS Genet. 3, e56-e56 (2007).
- Dillin, A. Rates of behavior and aging specified by mitochondrial function during development. Science. 298, 2398-2401 (2002).
- Hamilton, B. A systematic RNAi screen for longevity genes in C. elegans. Genes Dev. 19, 1544-1555 (2005).
- Hansen, M., Hsu, A. L., Dillin, A., Kenyon, C. New genes tied to endocrine, metabolic, and dietary regulation of lifespan from a Caenorhabditis elegans genomic RNAi screen. PLoS Genet. 1, 119-128 (2005).
- Lee, S. S. A systematic RNAi screen identifies a critical role for mitochondria in C. elegans longevity. Nat Genet. 33, 40-48 (2003).
- Smith, E. D. Age- and calorie-independent life span extension from dietary restriction by bacterial deprivation in Caenorhabditis elegans. BMC Dev Biol. 8, 49-49 (2008).
- Hodgkin, J., Horvitz, H. R., Brenner, S. Nondisjunction Mutants of the Nematode CAENORHABDITIS ELEGANS. 遗传学. 91, 67-94 (1979).
- Emmons, S. W., Sternberg, P. W., Riddle, D. L., Blumenthal, T., Meyer, B. J., Priess, J. R. . C. ELEGANS II. , (1997).
- Lipton, J., Kleemann, G., Ghosh, R., Lints, R., Emmons, S. W. Mate searching in Caenorhabditis elegans: a genetic model for sex drive in a simple invertebrate. J Neurosci. 24, 7427-7434 (2004).
- Davis, B. O., Anderson, G. L., Dusenbery, D. B. Total luminescence spectroscopy of fluorescence changes during aging in Caenorhabditis elegans. 生物化学. 21, 4089-4095 (1982).
- Klass, M. R. Aging in the nematode Caenorhabditis elegans: major biological and environmental factors influencing life span. Mech Ageing Dev. 6, 413-429 (1977).
- Steinkraus, K. A. Dietary restriction suppresses proteotoxicity and enhances longevity by an hsf-1-dependent mechanism in Caenorhabditis elegans. Aging Cell. 7, 394-404 (2008).
