תאים אפיתל עכבר החלב טופס Mammospheres במהלך התמיינות Lactogenic
Summary
HC11 בידול lactogenic יכול להיות מאופיין על ידי היווצרות של מבנים כיפה המכונה mammospheres. מבנים ניתן המנויים על ידי מיקרוסקופ לעומת שלב כדי לסייע לכימות בידול lactogenic.
Abstract
מדד פנוטיפי נפוץ כדי לקבוע את מידת הבידול lactogenic בתוך החלב עכבר תרבויות אפיתל התא הוא היווצרות של מבנים דמויי כיפה תא המכונה mammospheres<sup> 1</sup>. הקו HC11 תא הועסק כמערכת מודל לחקר ויסות התמיינות lactogenic החלב הן<em> במבחנה</em> ו<em> In vivo</em<sup> 2</sup>. HC11 תאים להבדיל לסנתז חלבוני החלב התגובה לטיפול עם הורמונים lactogenic. בעקבות צמיחה של תאים HC11 עכבר החלב אפיתל כדי מפגש, בידול lactogenic היה המושרה על ידי תוספת של שילוב של הורמונים lactogenic כולל dexamethasone, אינסולין, פרולקטין, המכונה מח"ש. HC11 התאים המושרה להבדיל צולמו בזמנים של עד 120 שעות אינדוקציה הודעה בידול ומספר mammospheres שהופיעו כל תרבות הייתה המנויים. גודלו של הפרט mammospheres בקורלציה עם מידת הבידול הזה מתואר התמונות של תאים מבדל.
Protocol
Discussion
על מנת הטכניקה הזו להיות מוצלחת באיכות הטובה ביותר, את לתאי האפיתל יש לשמור על מפגש קודם להיות מושרה עם הורמונים lactogenic. ייתכנו מצבים שבהם יש mammospheres רבים, מה שהופך את כימות קשה. לפיכך, למטרות כמותי עדיף לצלם את mammospheres בנקודת הזמן כאשר מספר mammospheres מסוגל לסמוך.
<p class="jove_c…Acknowledgements
קרנות מ בימוי congressionally למחקר רפואי הקרן מענק (DAMD17-01-0264) ל ML קטלר ארצות הברית הצבאית מכון הסרטן כדי ML קטלר נתמך העבודה.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| RPMI | Invitrogen | 21870076 | ||
| Fetal Bovine Serum | Atlanta Biologicals | S11550 | ||
| L-Glutamine | Gibco | 25030 | ||
| PenStrep | Gibco | 15140 | ||
| Hepes | Quality Biologicals | 118089060 | ||
| EGF | Sigma | E9644 | ||
| Insulin | Gibco | 12585-014 | ||
| Dexamethasone | Sigma | D1756 | ||
| Microscope | Olympus | IX71 | ||
| Digital Camera | QImaging | Retiga 2000RV Fast 1394 |
References
- Blatchford, D. R., Hendry, K. A., Turner, M. D., Burgoyne, R. D., Wilde, C. J. Vectorial secretion by constitutive and regulated secretory pathways in mammary epithelial cells. Epithelial Cell Biol. 4, 8-16 (1995).
- Wang, W. Glucocorticoid induced expression of connective tissue growth factor contributes to lactogenic differentiation of mouse mammary epithelial cells. J Cell Physiol. 214, 38-46 (2008).
