Células epiteliales mamarias de ratón forma Mammospheres durante la diferenciación lactogénica

Summary

HC11 diferenciación lactogénica se caracteriza por la formación de estructuras abovedadas conocida como mammospheres. Las estructuras se pueden enumerar por microscopía de contraste de fases para ayudar en la cuantificación de la diferenciación lactogénica.

Abstract

A medida fenotípica comúnmente utilizado para determinar el grado de diferenciación en lactogénica mamario de ratón cultivos de células epiteliales es la formación de estructuras en forma de cúpula de la célula conocida como mammospheres¹. La línea celular HC11 ha sido empleado como un sistema modelo para el estudio de la regulación de la diferenciación mamaria lactogénica tanto<em> In vitro</em> Y<em> In vivo</em². El HC11 células se diferencian y sintetizar las proteínas de la leche en respuesta al tratamiento con hormonas lactogénica. Tras el crecimiento de la HC11 ratón las células epiteliales mamarias a la confluencia, la diferenciación lactogénica fue inducida por la adición de una combinación de hormonas lactogénica incluyendo la dexametasona, insulina y prolactina, que se refiere a disminuir a medida. El HC11 células inducidas a diferenciarse fueron fotografiados, a veces hasta 120 horas después de la inducción de la diferenciación y el número de mammospheres que aparecieron en cada cultura se enumeran. El tamaño de la mammospheres individuo se correlaciona con el grado de diferenciación y esto se muestra en las imágenes de la diferenciación de las células.

Protocol

El HC11 células fueron cultivadas hasta confluencia durante 6 días en medio RPMI 1640 suplementado con suero bovino fetal al 10%, insulina 5μg/ml, HEPES 10 mM, el factor de 10ng/ml crecimiento epidérmico (EGF) la debida competencia. Las células fueron lavadas con PBS y se mantiene en los medios de crecimiento sin EGF durante 24 horas. Para inducir la diferenciación lactogénica las células fueron incubadas en medio de diferenciación, es decir, RPMI con dexametasona (10 -6 M), insulina (5 mg / ml) …

Discussion

Para que esta técnica tenga éxito y sea de la mejor calidad, las células epiteliales se debe mantener en la confluencia antes de ser inducido con hormonas lactogénica. Puede haber situaciones en las que se mammospheres numerosas, lo que hace difícil la cuantificación. Por lo tanto, a efectos cuantitativos, es mejor para fotografiar el mammospheres en un punto de tiempo cuando el número de mammospheres es capaz de ser contados.

Si bien existen diversos marcadores moleculares para deter…

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
RPMI		Invitrogen	21870076
Fetal Bovine Serum		Atlanta Biologicals	S11550
L-Glutamine		Gibco	25030
PenStrep		Gibco	15140
Hepes		Quality Biologicals	118089060
EGF		Sigma	E9644
Insulin		Gibco	12585-014
Dexamethasone		Sigma	D1756
Microscope		Olympus	IX71
Digital Camera		QImaging	Retiga 2000RV Fast 1394