单从小鼠锥感光细胞吸录音

Summary

我们将展示如何从单一的鼠标采用吸电极锥记录闪光的反应。

Abstract

在视网膜上的杆和锥光感受器负责光检测。在黑暗中，环核苷酸门控技术（CNG）外段的渠道是开放的，允许离子流稳步向内穿过细胞膜，去极化的细胞。光线照射触发关闭的CNG通道，阻止外来阳离子电流的流动，从而导致细胞超极化。基于光感受器的极性，吸记录方法是发达国家在20世纪70年代，不像传统的膜片钳技术，不需要穿透质膜¹。绘制成一个紧密拟合的玻璃吸管充满了细胞外液的外节，可以录制测试闪光曝光后单个细胞的电流变化。但是，这种行之有效的“外段（操作系统）”吸气录制不适合鼠标锥录音，因为在小鼠视网膜（3％）和确定锥体困难的视锥细胞的比例很低外节。近日，在段内（中）录制的配置吸引到录音吸液管内段/核区的感光^2,3。在这段视频中，我们将展示如何从个别鼠标使用单细胞吸电极锥photoresponses记录。

Protocol

制作电极请使用微量拉马的记录电极和波兰与加热丝在显微镜下的电极。鼠标锥单细胞吸记录，电极尖端内径约6-7微米。 准备参比电极。称取蒸馏水1％琼脂。在热水浴融化的琼脂溶液。用1％琼脂使用注射器填充玻璃吸液管（L = 100毫米，外径/ ID = 1/0.75毫米）。巩固在室温下10分钟的琼脂。 切成半使用钻石刀的移液器。 对照品溶液的参比电极浸泡至少24小时在4 ° C。 </l…

Discussion

发展三十年前从感光细胞的单细胞吸录音。它使我们能够记录光刺激引起的不穿透细胞膜的跨膜电流变化。由于高的细胞与细胞间的粘附，它是很难隔离鼠标像两栖类动物的视网膜视网膜健康的单杆和锥，它是很难找到的比例很低（3％）和小尺寸，由于个人锥。段内（IS – 在）记录方法，记录从目前的几个感光器，其中可能包括一个圆锥体的内在环节，克服了这一困难。在野生型小鼠，反应应该?…