Summary

الرنين المغناطيسي الطيفي للعيش ذبابة الفاكهة السوداء البطن غزل باستخدام زاوية ماجيك

Published: April 15, 2010
doi:

Summary

هذه التقنية تتيح استخدام السحر زاوية عالية الدقة الغزل بروتون MR الطيفي (HRMAS 1H – MRS) لتوصيف الجزيئي للعيش<em> ذبابة الفاكهة السوداء البطن</em> مع مطياف التقليدية تسلا 14.1 مجهزة HRMAS التحقيق.

Abstract

عالية الدقة ماجيك زاوية الغزل (HRMAS) بروتون التحليل الطيفي بالرنين المغناطيسي (<sup> 1</sup> H – MRS) هي رواية غير المدمرة تقنية الذي يحسن الخط الطيفي ويسمح بعرض عالية الدقة الأطياف التي يمكن الحصول عليها من مقتطفات ، وخلايا سليمة والثقافات الخلية ، والأنسجة سليمة أكثر أهمية للتحقيق في العلاقات بين والعمليات الأيضية الخلوية.<em> في الجسم الحي</em> HRMAS<sup> 1</sup> H – MRS الدراسات حتى الآن لم يتم الإبلاغ في ذبابة الفاكهة العيش<em> ذبابة الفاكهة السوداء البطن.</em><em> ذبابة الفاكهة ،</em> كما كائن أبسط الوراثية ، ويسمح للفحص وظائف متعددة البيولوجي ومختلف مسارات إشارات الحفاظ تطويريا على مستوى الحي كله وانها نموذجا مفيدا للتحقيق في علم الوراثة والفيزيولوجيا. تحقيقا لهذه الغاية ، قمنا بتطوير ونفذت<em> في الجسم الحي</em> HRMAS<sup> 1</sup> H – MRS طريقة لتحقيق العيش<em> ذبابة الفاكهة</em> 14،1 في T. هنا ، ونحن الملامح الأساسية لHRMAS<sup> 1</sup> H – MRS بروتوكول لالتوصيف الجزيئي لل<em> ذبابة الفاكهة</em> مع مطياف MR تقليدية مجهزة HRMAS التحقيق. هذا الأسلوب هو الرواية ،<em> في الجسم الحي ،</em> غير مدمرة<em> ذبابة الفاكهة</emقد> نهج القياس المستقلب ، التي تتيح تحديد المؤشرات الحيوية المرض ، وبالتالي المساهمة في التنمية العلاجية الرواية.

Protocol

الجزء 1 : ذبابة الفاكهة التحضير لقياسات HRMAS باستخدام معيار flylab الإجراءات 1 ، وجمع الذباب eclosing حديثا لمدة 3 أيام ، ونقل لهم يطير قارورة تحتوي على المواد الغذائية الطازجة الطيران. احتضان الذباب جمعت لمدة 5 أيام ?…

Discussion

مع استثناء من التقرير الأخير للجدوى في التصوير بالرنين المغناطيسي المجراة في ذبابة الفاكهة 6 ، في الدراسات المجراة في ذبابة الفاكهة MRS لم يتم الإبلاغ عنها. في هذا البروتوكول ، ونحن تصف تنفيذ رواية في HRMAS فيفو نهج H – 1 MRS للكشف عن …

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

وأيد هذا العمل في جزء من المعاهد الوطنية للصحة (NIH) منحة لورانس G. AI063433 رحمة ، معهد المعاهد الوطنية للصحة (NIH) مركز غرانت (P50GM021700) لرونالد تومبكينس G. (A. الأغنية Tzika ، مدير جوهر الرنين المغناطيسي) ، ومستشفى للأطفال في Shriner منحة بحثية (# 8893) إلى ألف الأغنية Tzika. نشكر Dionyssios Mintzopoulos دكتوراه للحصول على المساعدة في المراحل الأولى من تطوير هذا البروتوكول وأوفيديو جيم دكتوراه Andronesi للحصول على المساعدة مع تسلسل نبض TOBSY.

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
Deuterium oxide Reagent Sigma-Aldrich 7789-20-0  
3-(trimethylsilyl)propionic-2,2,3,3-d4 acid Reagent Sigma-Aldrich 24493-21-8  
agar, sucrose, yeast, cornmeal Food Genesee Scientific Corporation   http://www.flystuff.com/
Oregon RS or Canton-S flies Adult fly lines Bloomington Stock Center   http://flystocks.bio.indiana.edu/
Paintbrush Equipment     (size 0)
2ml tubes Equipment Fisher Scientific K749521-1590  
Fly incubators Equipment     high humidity capacity (60-75%), adjustable temperature, and a 12 h:12 h light: dark cycle.
Bruker Bio-Spin Avance NMR spectrometer (600.13 MHz) 4mm triple resonance (1H, 13C, 2H) HRMAS probe Equipment Bruker Bio-Spin    
BTO-2000 unit in combination with a MAS pneumatic unit Equipment Bruker Bio-Spin    
4mm zirconium oxide rotor (capacity 50 ul) Equipment Bruker Bio-Spin B3829 (Bruker store)  
MestReC (Mestrelab Research) Software     1D NMR spectra analysis
http://mestrelab.com/
SPARKY 3, USCF Software     2D NMR spectra analysis
http://www.cgl.ucsf.edu/home/sparky/

References

Play Video

Cite This Article
Righi, V., Apidianakis, Y., Rahme, L. G., Tzika, A. A. Magnetic Resonance Spectroscopy of live Drosophila melanogaster using Magic Angle Spinning. J. Vis. Exp. (38), e1710, doi:10.3791/1710 (2010).

View Video