Summary

Preparazione di oligomeriche β-amiloide 1-42 E induzione di Impairment plasticità sinaptica in fettine di ippocampo

Published: July 14, 2010
doi:

Summary

Una caratteristica della malattia di Alzheimer è l'elevazione di Aβ<sub> 1-42</sub> Peptide. Qui forniamo un protocollo per la preparazione di Aβ sintetico<sub> 1-42</sub> Oligomeri, che danneggia dell'ippocampo potenziamento a lungo termine, un cellulare correlato di memoria. Questa procedura è utile per lo studio dei meccanismi di Aβ indotta lo screening della patologia e della droga.

Abstract

Riduzione di valore delle connessioni sinaptiche è probabile che alla base della amnesico sottili cambiamenti che si verificano nelle prime fasi del morbo di Alzheimer s (AD). β-amiloide (Aβ), un peptide prodotto in grandi quantità in AD, è noto per ridurre potenziamento a lungo termine (LTP), un cellulare correlato di apprendimento e memoria. Infatti, compromissione LTP causata da Aβ è un utile paradigma sperimentale per lo studio delle disfunzioni sinaptiche nei modelli dC e lo screening per i farmaci in grado di mitigare tali menomazioni o ritorno sinaptica. Studi hanno dimostrato che Aβ produce l'interruzione LTP preferenzialmente attraverso la sua forma oligomerici. Qui forniamo un protocollo dettagliato per LTP da compromettere la perfusione di oligomerized sintetico Aβ1-42 peptide su fettine di ippocampo acuta. In questo video, delineiamo un passo-passo procedura per la preparazione di Aβ oligomerici<sub> 1-42</sub>. Poi, seguiamo un esperimento individuale in cui è ridotta LTP in fettine di ippocampo esposti a Aβ oligomerized<sub> 1-42</sub> Rispetto a fette in un esperimento di controllo dove non Aβ<sub> 1-42</subEsposizione> era accaduto.

Protocol

Risospendere peptide β-amiloide Prima di iniziare sono pronti: Aβ 1-42 (polvere liofilizzata) 1,1,1,3,3,3-esafluoro-2-propanolo (HFIP) Low-binding tubi in polipropilene microcentrifuga (1,5 ml) Hamilton siringa a tenuta di gas con stop tuffo Teflon (250 microlitri) Dimetilsolfossido (DMSO) Lasciare Aβ liofilizzato 1-42 equilibrare a temperatura ambiente per 30 minuti per evitare la condensa dopo l&…

Discussion

Come descritto in precedenza, diversi problemi nella preparazione di Aβ oligomerici può provocare LTP inalterata. Un modo per valutare se il degrado Aβ o la mancanza di oligomerizzazione Aβ potrebbe essersi verificato è quello di valutare la preparazione Aβ con TRIS-Tricine PAGE / analisi Western Blotting e ultracentrifugazione analitica (non descritte in questo protocollo). Quando Western Blotting campioni sono preparati in condizioni non-denaturing/non-reducing, una preparazione di successo dovrebbe generare una…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Questo lavoro è stato sostenuto da NIH National Institute of Neurological Disorder and Stroke (NINDS) (NS049442).>

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
Aβ 1-42 (lyophilized)   American Peptide Co. 62-0-80  
1,1,1,3,3,3-Hexafluoro-2-Propanol (HFIP)   Fluka 52517  
Dimethylsulfoxide (DMSO)   Biotium 90082  
50mL Polypropylene Centrifuge Tubes   Corning 05-538-67  
1.5ml MaxyClear microtubes Maximum recovery   Axygen MCT-150-L-C  
Phosphate-Buffered Saline pH 7.4   Invitrogen-Gibco 10010-023  
GASTIGHT Syringes 250 μL   Hamilton 1725  
Bath sonicator   Branson 3510  
Savant SpeedVac Concentrator System   Various distributors SC 110A  

References

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Cite This Article
Fa, M., Orozco, I. J., Francis, Y. I., Saeed, F., Gong, Y., Arancio, O. Preparation of Oligomeric β-amyloid1-42 and Induction of Synaptic Plasticity Impairment on Hippocampal Slices. J. Vis. Exp. (41), e1884, doi:10.3791/1884 (2010).

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