Summary

Preparación de oligómeros β-amiloide 1-42 Y la inducción del deterioro de plasticidad sináptica en rodajas de hipocampo

Published: July 14, 2010
doi:

Summary

Una de las características de la enfermedad de Alzheimer es la elevación de Aß<sub> 1-42</sub> Péptido. Aquí les ofrecemos un protocolo para la preparación de Aß sintético<sub> 1-42</sub> Oligómeros, lo cual afecta el hipocampo potenciación a largo plazo, un celular correlato de la memoria. Este procedimiento es útil para la investigación de los mecanismos de Aß inducida por detección de patología y de drogas.

Abstract

Deterioro de las conexiones sinápticas es probable que subyacen a los cambios sutiles que ocurren amnésico en las primeras etapas de la enfermedad de Alzheimer s (AD). β-amiloide (Aß), un péptido producido en grandes cantidades en el año, se sabe que reduce potenciación a largo plazo (LTP), un celular correlato de aprendizaje y la memoria. De hecho, el deterioro causado por Aß LTP es un paradigma útil experimental para el estudio de las disfunciones sináptica en modelos de AD y de detección de drogas capaces de mitigar o revertir tales alteraciones sinápticas. Los estudios han demostrado que Aß produce la interrupción de LTP preferentemente a través de su forma oligomérica. Aquí les ofrecemos un protocolo detallado para la LTP impedir en la perfusión de oligomerized sintéticos Aβ1-42 péptido en agudas rodajas de hipocampo. En este video, se describe un procedimiento paso a paso para la preparación de Aß oligoméricos<sub> 1-42</sub>. Luego, seguimos un experimento individual en la que la LTP se reduce en rodajas de hipocampo expuestas a Aß oligomerized<sub> 1-42</sub> En comparación con las rebanadas en un experimento de control cuando no se Aß<sub> 1-42</subExposición> había ocurrido.

Protocol

Resuspensión de β-amiloide Antes de empezar se han preparado: Aß 1-42 (polvo liofilizado) 1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-propanol (HFIP) Baja unión a tubos de polipropileno de microcentrífuga (1,5 ml) Herméticas Hamilton jeringa con parada caída de teflón (250 l) Dimetilsulfóxido (DMSO) Permitir Aß 1-42 liofilizado para equilibrar a temperatura ambiente durante 30 minutos para evitar la condensaci…

Discussion

Como se describió anteriormente, existen varios problemas en la preparación de Aß oligoméricas pueden dar lugar a LTP intacta. Una forma de evaluar si la degradación de Aß o la falta de oligomerización Aß pudo haber ocurrido es evaluar la preparación de Aß con TRIS-Tricina PÁGINA / análisis de Western Blot y ultracentrifugación analítica (no se describe en este protocolo). Cuando Western Blotting muestras se preparan en condiciones non-denaturing/non-reducing, una preparación exitosa debe generar una firm…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Este trabajo fue apoyado por el NIH Instituto Nacional de Trastornos Neurológicos y Accidentes Cerebrovasculares (NINDS) (NS049442).>

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
Aβ 1-42 (lyophilized)   American Peptide Co. 62-0-80  
1,1,1,3,3,3-Hexafluoro-2-Propanol (HFIP)   Fluka 52517  
Dimethylsulfoxide (DMSO)   Biotium 90082  
50mL Polypropylene Centrifuge Tubes   Corning 05-538-67  
1.5ml MaxyClear microtubes Maximum recovery   Axygen MCT-150-L-C  
Phosphate-Buffered Saline pH 7.4   Invitrogen-Gibco 10010-023  
GASTIGHT Syringes 250 μL   Hamilton 1725  
Bath sonicator   Branson 3510  
Savant SpeedVac Concentrator System   Various distributors SC 110A  

References

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Cite This Article
Fa, M., Orozco, I. J., Francis, Y. I., Saeed, F., Gong, Y., Arancio, O. Preparation of Oligomeric β-amyloid1-42 and Induction of Synaptic Plasticity Impairment on Hippocampal Slices. J. Vis. Exp. (41), e1884, doi:10.3791/1884 (2010).

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