Summary

Β-amiloid Oligomerik hazırlanması 1-42 İndüksiyon

Published: July 14, 2010
doi:

Summary

Alzheimer hastalığının bir özelliği Aβ yükseklik.<sub> 1-42</sub> Peptid. Burada sentetik Aβ hazırlanması için bir protokol<sub> 1-42</subHipokampal Uzun Vadeli potansiyelize bozar> oligomerler, hücresel bellek ilişkilidir. Bu prosedür Aβ indüklenen patoloji ve ilaç tarama mekanizmaları araştırmak için yararlıdır.

Abstract

Sinaptik bağlantıları değer düşüklüğü, Alzheimer Hastalığı (AH) erken aşamalarında ortaya çıkan ince amnezik değişikliklerin altında yatan muhtemel. β-amiloid (Aβ), AD yüksek miktarlarda üretilen bir peptid, hücresel bir öğrenme ve hafıza ile ilişkili Uzun Vadeli potansiyelize (LTP), azaltmak için bilinir. Gerçekten de, Aβ neden LTP bozukluğu AD modelleri ve sinaptik işlev bozuklukları gibi sinaptik bozuklukları azaltıcı veya geri alınmasının yeteneğine tarama ilaçlar için eğitim için yararlı bir deneysel paradigma. Çalışmalar Aβ oligomerik formu ile tercihen LTP bozulma ürettiğini göstermiştir. Burada oligomerized sentetik perfüzyon akut hipokampal dilimleri üzerine Aβ1-42 peptid bozarak LTP için ayrıntılı bir protokol sağlar. Bu video, oligomerik Aβ hazırlanması için adım adım prosedürü anahat<sub> 1-42</sub>. Sonra, biz LTP oligomerized Aβ maruz hipokampal dilim azalmış olduğu ayrı bir deney takip<sub> 1-42</sub> Kontrol deneyde hiçbir Aβ dilimlerine göre<sub> 1-42</sub> Maruz ortaya çıkmıştı.

Protocol

Resuspending β-amiloid peptid Başlamadan önce hazır olması: Aβ 1-42 (liyofilize toz) 1,1,1,3,3,3-Hexafluoro-2-Propanol (HFIP) Düşük bağlayıcı polipropilen mikrosantrifüj tüpleri (1,5 ml) Teflon dalma durağı (250 ul) ile gaz geçirmez Hamilton şırınga Dimethylsülfoksit (DMSO) Liyofilize Aβ 1-42 peptid flakon açılması üzerine yoğunlaşmayı önlemek için 30 dakika boyunca oda …

Discussion

Yukarıda açıklandığı gibi, oligomerik Aβ hazırlanması bozulmamış LTP çeşitli sorunlara neden olabilir. Aβ bozulması veya Aβ oligomerization eksikliği oluşmuş olabilir olmadığını değerlendirmek için bir yolu TRIS Tricine SAYFA / Western Blot analizi ve analitik Ultrasantrifügasyon (Bu protokol açıklanmayan) kullanarak Aβ hazırlık değerlendirmektir. Western Blot örnekleri non-denaturing/non-reducing koşulları altında hazırlanan, başarılı bir hazırlık monomerlerin ve farklı oligom…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Bu çalışma Ulusal Sağlık Enstitüsü, Ulusal Nörolojik Bozukluklar ve İnme Enstitüsü (NINDS) (NS049442) tarafından desteklenmiştir.>

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
Aβ 1-42 (lyophilized)   American Peptide Co. 62-0-80  
1,1,1,3,3,3-Hexafluoro-2-Propanol (HFIP)   Fluka 52517  
Dimethylsulfoxide (DMSO)   Biotium 90082  
50mL Polypropylene Centrifuge Tubes   Corning 05-538-67  
1.5ml MaxyClear microtubes Maximum recovery   Axygen MCT-150-L-C  
Phosphate-Buffered Saline pH 7.4   Invitrogen-Gibco 10010-023  
GASTIGHT Syringes 250 μL   Hamilton 1725  
Bath sonicator   Branson 3510  
Savant SpeedVac Concentrator System   Various distributors SC 110A  

References

  1. Stine, W. B., Dahlgren, K. N., Krafft, G. A., LaDu, M. J. In vitro characterization of conditions for amyloid-beta peptide oligomerization and fibrillogenesis. J Biol Chem. 278, 11612-11622 (2003).
  2. Vitolo, O. V. Amyloid beta -peptide inhibition of the PKA/CREB pathway and long-term potentiation: reversibility by drugs that enhance cAMP signaling. Proc Natl Acad Sci U S A. 99, 13217-13221 (2002).
  3. Puzzo, D. Picomolar amyloid-beta positively modulates synaptic plasticity and memory in hippocampus. J Neurosci. 28, 14537-14545 (2008).
  4. Lewczuk, P. Effect of sample collection tubes on cerebrospinal fluid concentrations of tau proteins and amyloid beta peptides. Clin Chem. 52, 332-334 (2006).
  5. Masliah, E. Mechanisms of synaptic dysfunction in Alzheimer’s disease. Histol Histopathol. 10, 509-519 (1995).
  6. Cullen, W. K., Suh, Y. H., Anwyl, R., Rowan, M. J. Block of LTP in rat hippocampus in vivo by beta-amyloid precursor protein fragments. Neuroreport. 8, 3213-3217 (1997).
  7. Itoh, A. Impairments of long-term potentiation in hippocampal slices of beta-amyloid-infused rats. Eur J Pharmacol. 382, 167-175 (1999).
  8. Walsh, D. M. Naturally secreted oligomers of amyloid beta protein potently inhibit hippocampal long-term potentiation in vivo. Nature. 416, 535-539 (2002).
  9. Lambert, M. P. nonfibrillar ligands derived from Abeta1-42 are potent central nervous system neurotoxins. Proc Natl Acad Sci U S A. 95, 6448-6453 (1998).
  10. Gong, B. Ubiquitin hydrolase Uch-L1 rescues beta-amyloid-induced decreases in synaptic function and contextual memory. Cell. 126, 775-788 (2006).
  11. Trinchese, F. Inhibition of calpains improves memory and synaptic transmission in a mouse model of Alzheimer disease. J Clin Invest. 118, 2796-2807 (2008).

Play Video

Cite This Article
Fa, M., Orozco, I. J., Francis, Y. I., Saeed, F., Gong, Y., Arancio, O. Preparation of Oligomeric β-amyloid1-42 and Induction of Synaptic Plasticity Impairment on Hippocampal Slices. J. Vis. Exp. (41), e1884, doi:10.3791/1884 (2010).

View Video