Transductie naar label PDX-tumorcellen: introductie van lentivirus dat fluorescerende marker uitdrukt in de tumorcel in vitro
Published: April 30, 2023
Abstract
Bron: Hanna, C., et al. Labeling van borstkanker patiënt-afgeleide xenografts met traceerbare reporters voor tumorgroei en metastase studies. J. Vis. Exp. (2016).
De volgende video beschrijft een techniek van transductie naar label (patiënt-afgeleide xenografts) PDX-tumorcellen, die wordt gebruikt voor het introduceren van lentivirus dat groen-fluorescerend eiwit en luciferase-verslaggevers in vitro in de tumorcel uitdrukt.
Protocol
1. Transductie van PDX-afgeleide tumorcellen Centrifugeer gedissocieerde tumorcellen op 300 g x 5 min en resuspend in 2 ml mammosfeermedia. Tel levensvatbare cellen met behulp van trypanblauwe uitsluiting (Geresuspendeerde verteerd cellen in 5 ml wasbuffer en tel zowel levensvatbare als niet-levensvatbare cellen met behulp van trypanblauwe uitsluiting. Meng kort 50 μl cellen en 50 μl trypanblauw en tel trypanblauw exclusief cellen met behulp van een hemocytometer). Bereid 10 ml mammosfeermedia met 8…
Representative Results
Figuur 1: Transductie-efficiëntie volgen in gedissocieerde PDX-cellen. A) PDX-gedissocieerde cellen verrijkt voor menselijke epitheelcellen (Lin+ uitputting) 24 uur na transductie met pSIH1-H1-copGFP-T2A-puro lentivirale deeltjes. B) PDX-gedissocieerde cellen van een afzonderlijk experiment, zonder epitheliale celverrijking, 72 uur na transductie met pHAGE-EF1aL-luciferase-UBC-GFP-W. B…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| DMEM/F12 (1:1) | Hyclone | SH30023.01 | |
| bFGF | BD Biosciences | 354060 | |
| EGF | BD Biosciences | 354001 | |
| Heparin | Sigma | H4784 | |
| B27 | Gibco/Thermo Fisher | 17504-44 | |
| Anti-fungi-antibiotics | Hyclone | SV30010 | |
| HBSS Red Ca2+/Mg2+ free | Hyclone | SH30031.02 | |
| Hepes | |||
| Cultrex | Cultrex | 3433-005-01 | Basement Matrix Extract (BME) |
| 30 °C shaker | NewBrunswick Scientific CO. INC | Series 25 Incubator Shaker |
Cite This Article
Transduction to Label PDX Tumor Cells: Introducing Lentivirus Expressing Fluorescent Marker into the Tumor Cell In Vitro. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20214, doi: (2023).