Transduktion zur Kennzeichnung von PDX-Tumorzellen: Einführung des Lentivirus, der fluoreszierende Marker in die Tumorzelle in vitro ausdrückt
Published: April 30, 2023
Abstract
Quelle: Hanna, C., et al. Kennzeichnung von von Brustkrebspatienten abgeleiteten Xenografts mit traceable Reportern für Tumorwachstums- und Metastasierungsstudien. J. Vis. Exp. (2016).
Das folgende Video beschreibt eine Technik der Transduktion zur Kennzeichnung (patientenabgeleiteter Xenografts) PDX-Tumorzellen, die zur Einführung von Lentivirus verwendet wird, das grünfluoreszierendes Protein und Luziferase-Reporter in die Tumorzelle in vitro ausdrückt.
Protocol
1. Transduktion von PDX-abgeleiteten Tumorzellen Zentrifuge dissoziierte Tumorzellen bei 300 g x 5 min und resuspendieren in 2 ml Mammosphärenmedien. Zählen Sie lebensfähige Zellen mit Trypan-Blau-Ausschluss (Resuspend verdaut Zellen in 5 ml Waschpuffer und zählen Sie sowohl lebensfähige als auch nicht lebensfähige Zellen mit Trypan-Blau-Ausschluss. Mischen Sie kurz 50 l Zellen und 50 l Trypanblau und zählen Sie Trypan-Blau ohne Zellen mit einem Hämozytometer). Bereiten Sie 10 ml Mammosphären…
Representative Results
Abbildung 1: Nachverfolgen der Transduktionseffizienz in dissoziierten PDX-Zellen. A) PDX-dissoziierte Zellen, angereichert mit menschlichen Epithelzellen (Lin+ Erschöpfung) 24 Stunden nach Transduktion mit pSIH1-H1-copGFP-T2A-puro lentiviralen Partikeln. B) PDX-dissoziierte Zellen aus einem separaten Experiment, ohne Epithelzellanreicherung, 72 hr nach Transduktion mit pHAGE-EF1aL-luc…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| DMEM/F12 (1:1) | Hyclone | SH30023.01 | |
| bFGF | BD Biosciences | 354060 | |
| EGF | BD Biosciences | 354001 | |
| Heparin | Sigma | H4784 | |
| B27 | Gibco/Thermo Fisher | 17504-44 | |
| Anti-fungi-antibiotics | Hyclone | SV30010 | |
| HBSS Red Ca2+/Mg2+ free | Hyclone | SH30031.02 | |
| Hepes | |||
| Cultrex | Cultrex | 3433-005-01 | Basement Matrix Extract (BME) |
| 30 °C shaker | NewBrunswick Scientific CO. INC | Series 25 Incubator Shaker |
Cite This Article
Transduction to Label PDX Tumor Cells: Introducing Lentivirus Expressing Fluorescent Marker into the Tumor Cell In Vitro. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20214, doi: (2023).