PDX Tümör Hücrelerini Etiketlemeye Dönüştürme: Tümör Hücresi In Vitro'ya Floresan İşaretleyiciyi İfade Eden Lentivirüs'ün Tanıtılması
Published: April 30, 2023
Abstract
Kaynak: Hanna, C., vd. Meme Kanseri Hasta kaynaklı Ksinograftların Tümör Büyümesi ve Metastaz Çalışmaları için İzlenebilir Muhabirlerle Etiketlenerek Etiketlendi. J. Vis. Exp. (2016).
Aşağıdaki videoda, yeşil floresan protein ve luciferaz muhabirlerini tümör hücresi in vitrosuna ifade eden lentivirüsün tanıtılmasında kullanılan PDX tümör hücrelerini etiketlemeye (hasta kaynaklı ksenograftlar) dönüştürme tekniği açıklanmaktadır.
Protocol
1. PDX türevi Tümör Hücrelerinin Transdüksiyon Santrifüj 300 g x 5 dk’da tümör hücrelerini ayırır ve 2 ml mammosfer ortamlarında yeniden biriktirir. Trypan mavi dışlama kullanarak uygulanabilir hücreleri sayın (Sindirilmiş hücreleri 5 ml yıkama tamponunda yeniden yaşayın ve trippan mavi dışlama kullanarak hem uygulanabilir hem de canlı olmayan hücreleri sayın. Kısaca, 50 μl hücre ve 50 μl trippan mavisi karıştırın ve bir hemositometre kullanarak trypan-blue hariç hücreleri sa…
Representative Results
Şekil 1: Ayrışmış PDX Hücrelerinde Transdüksiyon Verimliliğini İzleme. A) PSIH1-H1-copGFP-T2A-puro lentiviral parçacıklarla transdüksiyondan 24 saat sonra insan epitel hücreleri (Lin+ tükenmesi) için zenginleştirilmiş PDX-dissositasyonlu hücreler. B) PDX-dissositlenmiş hücreler ayrı bir deneyden, epitel hücre zenginleştirmesi olmadan, pHAGE-EF1aL-luciferaz-UBC-GFP…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| DMEM/F12 (1:1) | Hyclone | SH30023.01 | |
| bFGF | BD Biosciences | 354060 | |
| EGF | BD Biosciences | 354001 | |
| Heparin | Sigma | H4784 | |
| B27 | Gibco/Thermo Fisher | 17504-44 | |
| Anti-fungi-antibiotics | Hyclone | SV30010 | |
| HBSS Red Ca2+/Mg2+ free | Hyclone | SH30031.02 | |
| Hepes | |||
| Cultrex | Cultrex | 3433-005-01 | Basement Matrix Extract (BME) |
| 30 °C shaker | NewBrunswick Scientific CO. INC | Series 25 Incubator Shaker |
Cite This Article
Transduction to Label PDX Tumor Cells: Introducing Lentivirus Expressing Fluorescent Marker into the Tumor Cell In Vitro. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20214, doi: (2023).