偽骨折：急性末梢組織外傷モデル
Summary
偽骨折、無菌筋骨格系の外傷の再現性のマウスモデルは、後期長期外傷後の免疫応答の評価することができます。この記事では、複数の外傷の研究を可能にするために実験モデルの組み合わせの可能性を含む、ステップごとのモデルの段階の手続きの実行を、説明します。
Abstract
外傷に続いて多臓器不全と外傷患者の高い死亡率につながることができる初期のハイパー反応性炎症反応があり、この応答は、しばしば感染症の臨床的合併症を追加する遅延免疫抑制を伴っているとも死亡率を増加させることができる1-9。多くの研究は、外傷に続く免疫系の反応性にこれらの変化を評価し始めている。10-15
免疫応答に関与する分子経路を評価するために詳細な調査で、これらの株の援助16から21、免疫学的研究は大幅にin vivoでのモデリングで使用可能なトランスジェニックやノックアウトマウスのさまざまなを介してサポートされています。
マウスでは骨折固定技術は、複雑で簡単に再現できないことができるように実験的なマウス外傷のモデリングにおける課題は、長期的な調査です。22から30
動物の移動の自由と麻酔の継続的、長期使用せずに長期生存を可能にしながらこの偽骨折モデル、簡単に再現外傷モデルでは、免疫学的に四肢の骨折の環境を模倣することで、これらの困難を克服しています。目的は、長骨の骨折の特徴を再現することです。負傷筋肉や軟組織がネイティブ骨を壊すことなく、損傷した骨や骨髄にさらされている。
後肢に二国間の筋肉の挫滅、これらの負傷者の筋肉に骨液の注入に続いて：偽骨折モデルは、2つの部分から成ります。骨のソリューションは、年齢と体重をマッチさせた同系ドナーの両方後肢から長骨を採取することによって調製される。これらの骨は、粉砕し、リン酸に再懸濁されている骨のソリューションを作成するために緩衝生理食塩水。
二国間の大腿骨骨折は、四肢の外傷の一般的に使用されると十分に確立されたモデルであり、偽骨折モデルの開発中に比較モデルでした。我々は無菌まだ比例して重篤な末梢組織の外傷のモデルを望んでいたとして、利用可能な骨折モデルの様々の中で、我々は、偽骨折に対する我々の比較などの軟部組織損傷と骨折の閉鎖法を使用することにしました。31
出血性ショック、重度の外傷の設定で一般的な所見であり、グローバルな血流低下は、外傷のモデルに非常に関連する要素を追加します。32〜36偽骨折モデルは容易に高い重症の多発外傷モデルの出血性ショックモデルと組み合わせることができます。 。。37
Protocol
1。楽器と手術野の準備： すべての実験手順は無菌操作を使用して実行されます。開始する前に、実験エリアは、徹底的に洗浄し、滅菌する必要があります。ベンチは空気乾燥し、70％アルコールでダウン拭くために許可され、消毒されるべきである。実験的な作業領域でドレッシング外科青いパッドと滅菌フィールドを配置します。 すべての材料や?…
Discussion
偽骨折、無菌筋骨格系の外傷の再現性のマウスモデルでは、外傷後の免疫応答の評価することができます。偽骨折モデルは、免疫学的に長骨の骨折の特徴のレクリエーションを通じて四肢の骨折の環境を模倣しています：傷ついた筋肉や軟組織が ネイティブ骨を壊すことなく、損傷した骨や骨髄にさらされている38,39二相性の免疫応答は、以下の見ることができます。 48時間前?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
出血性ショックGM053789の資金源/ナンバー分子生物学
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Surgical blue pad | Fisher Scientific | 50-7105 | ||
| Sterile Field dressings | Fisher Scientific | NC9517505 | ||
| Circulating heating pad 18″x26″ | Harvard | py872-5272 | ||
| Hot bead instrument sterilizer | VWR | 11156-002 | ||
| Stainless steel tray 8″ x 11″ | VWR | 62687-049 | ||
| Plexiglass boards (10x15x0.5cm) | University of Pittsburgh Machine shop | |||
| Tape rolls 1″ | Corporate Express | MMM26001 | ||
| 50cc conical tube | can be purchased through any global vendor | |||
| Straight side wide mouth jars (used as cap for nose cone) | VWR | 159000-058 | ||
| Oster A5 clippers w. size 40 blade | VWR | 10749-020 | ||
| Surgical scissors (straight – 12cm) | Fine Science Tools | 14068-12 | ||
| Hemostats curved -18cm | Harvard | 81331718 | ||
| Forceps (0.8mm-tip, curved-10cm) | Fine Science Tools | 11050-10 | ||
| Gauze 4″x4″ | can be purchased through any global vendor | |||
| 1.5cc microfuge tube | can be purchased through any global vendor | |||
| Ice bucket | can be purchased through any global vendor | |||
| Mortar and Pestle | Fisher | 12-961AA | ||
| 1cc syringe w/ 25G needle | Fisher Scientific | 14-826-88 | ||
| 20G needle | can be purchased through any global vendor | |||
| 1mL pipetteman | can be purchased through any global vendor | |||
| 1mL pipette tips | can be purchased through any global vendor | |||
| Falcon polystyrene 8ml tubes | VWR | 60819-331 | ||
| Sterilization pouch 3″x8″ | VWR | 24008 | ||
| Sterilization pouch 5″x10″ | VWR | 24010 | ||
| MacConkey II Agar plate | BD Biosciences | 221172 | ||
| Ethyl Alcohol – 200 proof | Pharmaco-AAPER | [70%] | ||
| Pentobarbital Sodium (Nembutol Sodium Solution) | Ovation | 70mg/kg | ||
| Aerrane (Isoflurane) | Baxter | 99.9% | ||
| Triadine Povidone Iodine (Betadine) | Triad disposables | |||
| Phosphate Buffered Saline (PBS) | ||||
| Buprenorphine HCl | Bedford Laboratories | 0.1mg/kg |
References
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PseudofractureHyper-reactive Inflammatory ResponseMultiple Organ DysfunctionHigh MortalityDelayed ImmunosuppressionClinical ComplicationsInfectionMortalityImmunologic StudiesTransgenic MiceKnockout MiceIn Vivo ModelingMolecular PathwaysFracture Fixation TechniquesPseudofracture ModelExtremity Fracture EnvironmentDamaged Bone And Bone Marrow
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Darwiche, S. S., Kobbe, P., Pfeifer, R., Kohut, L., Pape, H., Billiar, T. Pseudofracture: An Acute Peripheral Tissue Trauma Model. J. Vis. Exp. (50), e2074, doi:10.3791/2074 (2011).