Voorbereiding van de Rat Tail Pezen voor Biomechanische en Mechanobiological Studies
Summary
Dit artikel beschrijft de experimentele procedures gebruikt om de rattenstaart pezen voor te bereiden op biomechanische en mechanobiological studies. Verschillende functies van de belangrijkste stappen in voorbereiding worden gedemonstreerd, te beginnen met afzuiging, doorsnede meten, spoelen en laden in de bioreactor kamer.
Abstract
Rattenstaart pezen (RTO's) zijn een veel voorkomende biologisch model gebruikt in de experimentele in vitro studies op het gebied van pees fysiologie en tendinopathie. Het werken met de weefsels is een uitdaging, want ze zijn erg kwetsbaar, en tot nu toe was er geen rigoureus gedetailleerd protocol voor de isolatie.
Geconfronteerd met deze uitdagingen, hebben we methoden en instrumenten voor manipulatie van de RTO's en controle levensvatbaarheid van het weefsel, steriliteit en integriteit te vergemakkelijken. Dit artikel beschrijft de experimentele procedures gebruikt om de laboranten voor te bereiden op biomechanische en mechanobiological studies. Ons werk is onderverdeeld in vier stappen: extractie, doorsnede meten, spoelen en laden in de bioreactor kamer.
Bij elke stap worden alle procedures, materialen en manipulaties in detail gepresenteerd, zodat ze gemakkelijk kunnen worden gereproduceerd. Bovendien zijn de ontwikkelde specifieke instrumenten gepresenteerd: een manipulatie plaat gebruikt om de laboranten te scheiden, een optische micrometer tot het weefsel positie tijdens de doorsnede meet-en een verankering systeem om de laboranten hechten op een bioreactor.
Tot slot beschrijven we de resultaten die zijn verkregen na meerdere tests om onze werkwijze te valideren. De levensvatbaarheid, de steriliteit en integriteit evaluaties tonen aan dat onze procedures zijn streng genoeg voor de manipulaties van de kwetsbare weefsels, zoals rattenstaart pezen.
Protocol
Discussion
Door de toepassing van deze experimentele procedures, kunnen we een breed scala van gedrag in vitro studies op dit soort van weefsels. Zoals bijvoorbeeld, was een studie over weefseldegeneratie uitgevoerd door de toepassing van de onder-stimulatie tot laboranten voor een periode van tien dagen. Elke dag hebben we geëvalueerd weefsel mechanische eigenschappen in niet-destructieve spanningsrelaxatie tests. Aan het einde waren we in staat om RTT spanning variatie dus observeren en de progressie van de mechanische…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Dit artikel werd ondersteund door NSERC Grant # 299280, IRSST als een beurs aan G. Ouder en FRSQ als een undergraduate student onderzoek toe te kennen aan M. Cyr. Wij danken Yoan Lemieux-Laneville voor het uitvoeren van de manipulaties opgenomen op video.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| D-PBS | Reagent | Wisent inc. | 311-410-CL | Saline solution |
| Glucose | Reagent | Wisent inc. | 609-037-EL | Saline solution
1g/L |
| Antibiotics-antimycotics | Reagent | Invitrogen Corp. | 15240-062 | Saline solution
1% |
| DMEM | Reagent | Invitrogen Corp. | 12800-017 | Culture solution |
| Sodium Bicarbonate | Reagent | Wisent inc. | 600-105-CG | Culture solution 3.7g/L |
| FBS | Reagent | Wisent inc. | 090150 | Culture solution 10% |
| Antibiotics-antimycotics | Reagent | Invitrogen Corp. | 15240-062 | Culture solution 1% |
| Optic Micrometer | Tool | Custom-made | ||
| Manipulation plate | Tool | Custom-made | ||
| Bioreactor chamber | Tool | Custom-made |
References
- Bennett, M. B., Ker, R., Dimery, N., Alexander, R. Mechanical properties of various mammalian tendons. J. Zool. Lond. A209, 537-548 (1986).
- Dupuis, D. . Déshydratation de matrices collagéniques reconstruites in vitro: effets sur les propriétés mécaniques et histologiques [dissertation]. , 114-114 (1981).
- Haut, R. C. Age-dependent influence of strain rate on the tensile failure of rat tail tendon. Journal of Biomechanical Engineering. 105, 296-299 (1983).
- Huppé, N., Lessard, J. -. L., Langelier, E. A Bioreactor Design for the Mechanobiological Study of Soft Tissue Damage and Repair in Conditions that Provide the Best Approximation of Actual Use. , (1985).
- Langelier, E., Dupuis, D., Guillot, M., Goulet, F. &. a. m. p. ;. a. m. p., Rancourt, D. Cross-sectional profiles and volume reconstructions of soft tissues using laser beam measurements. J Biomech Eng. 126, 796-802 (2004).
- Lee, T. Q., Woo, S. L. -. Y. A new method for determining cross-sectional shape and area of soft tissues. J Biomech Eng. 110, 110-114 (1988).
- Parent, G., Cyr, M., Cousineau-Pelletier, P., Desbiens-Blais, F. &. a. m. p. ;. a. m. p., Langelier, E. Current Techniques for the Evaluation of Cross-Sectional Area in Rat Tail Tendons Generate Significant Errors. , (1985).
