Summary

Retina pigment epiteli Tüm Mount Fare Göz Diseksiyon

Published: February 27, 2011
doi:

Summary

Bir fare göz diseksiyon resmi bir gösteri, retinal pigment epitel bir bütün montaj.

Abstract

Memeli gözün arkasındaki retina pigment epitel (RPE), fotoreseptör (çubuklar ve koniler) içeren nöral retina altında yatıyor. RPE yakından sadece yukarıda nöral retina ile pigmentli küboid hücreleri ve iştiraklerin tek tabaka. Bu dernek, retina hastalıklarının çalışan araştırmacılar büyük ilgi RPE yapar. RPE homoloji yönettiği DNA onarımı, p un tahlil in vivo tayininde bir sitedir. Küçük boyutu nedeniyle teşrih (çapı 3.5mm hakkında) ve küresel şekli fare göz özellikle zordur. Bu makalede ayrıntılı olarak RPE bir bütün montaj ile sonuçlanan göz diseksiyon için bir prosedür ortaya koymaktadır. Bu prosedürde, küresel yapısı, karşı göz ile değil, nasıl çalıştığını gösteriyor. Kısaca, bağ dokusu, kas, ve optik sinir gözün arka kaldırılır. Sonra, kornea ve lens kaldırılır. Sonraki kalan doku önemli düzleşme, stratejik kesimler bu sonucu yapılır. Son olarak, nöral retina nazikçe, hala altta yatan koroid ve sklera bağlı bozulmamış bir RPE, ifşa, kapalı olduğunu kaldırdı. Bütün bu montaj p un tahlil veya RPE doku immünhistokimya veya immunofluorescent değerlendirilmesi için gerçekleştirmek için kullanılabilir.

Protocol

1. Gözün dışında fazladan doku çıkarın 1X PBS 35mm çanak kapağı içine dökün. Seviyesi sadece kapağın dudak altında olmalıdır. 35mm çanak depolama tüpü düz forseps, transfer göz (ler) kullanarak. 1: Gözler iki nedenden ötürü PBS batmış. Görmek ve onları kolayca kaldırmak ve 2, böylece gereksiz dokular göz "float". Diseksiyon sırasında asılı kalırken, gözün doğal olarak buna karşı ziyade bu şekli ile çalışmak için izin, küre şeklini koruya…

Discussion

RPE bir homoloji yönettiği onarım in vivo tayininde, p un testin sitesidir. P un tahlil homoloji yönettiği onarım sıklığı üzerine etkileri farklı DNA zararların 1,2 ve DNA hasarı sinyalizasyon ve onarım genleri 3,4,5 incelemek için kullanılır olmuştur. Bu testte, RPE 1 tek hücreli olaylar tespit son derece duyarlıdır. Ayrıca homoloji yönettiği onarım olayların gelişimi 6 sırasında zamanlama farklılıkları …

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Bu çalışma, Ulusal Çevre Sağlığı Bilimleri Enstitüsü tarafından desteklenen [K22ES012264 AJRB] ve Amerikan Kanser Derneği InstitutionalResearch Grant [ACS-IRG-00-173-04] Pilot projectaward [AJRB]. Biz yapmak için değil ne, örneğin, el yazması ve özellikle de video ve Adam Brown hakkında yorum eleştirel okuma Bishop laboratuar üyeleri de teşekkür ederim. Biz Greehey Çocuk Kanser Araştırmaları Enstitüsü'nden Dr Donald McEwen diseksiyon video film çekimi için kamera set-up onun diseksiyon kapsam / video kullanımına izin verdiği için teşekkür ederim. Biz netlik ve mikrodiseksiyon araçları tamir Corte Aletleri Daron Brown teşekkür ederim.

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
straight forceps   Roboz RS-4903 tip: .08 x .04 mm material: INOX
45° forceps   Roboz RS-5005 tip: .05 x.01 mm material: INOX
15° “up” forceps   Roboz RS-5045A tip: .1 x.06 mm material: INOX
spring scissors   Roboz RS-5604 comb. tip width 0.3mm cutting edge length 3mm material: stainless steel
binocular dissecting microscope   Ziess Discovery V.8 use reflected light source
phalloidin   Invitrogen A22283 Alexa Fluor 546

References

  1. Bishop, A. J., Kosaras, B., Sidman, R. L., Scheistl, R. H. Benzo(a)pyrene andX-rays induce reversions of the pink-eyed unstable mutation in the retinal pigmentepithelium of mice. Mutat. Res.. 457, 31-31 (2000).
  2. Reliene, R. H. l. a. v. a. c. o. v. e., Mahadevan, A., Baird, B., M, W., Schiestl, R. H. Diesel exhaust particles cause increased levels of DNA deletions after transplacental exposure in mice. Mutat. Res. 570, 245-2452 (2005).
  3. Bishop, A. J., Barlow, C., Wynshaw-Boris, A. J., Scheistl, R. H. Atm deficiency causes increased frequency of intrachromosomal homologous recombination in mice. Cancer Res. 60, 395-399 (2000).
  4. Brown, A. D., Claybon, A. B., Bishop, A. J. Mouse WRN helicase domain is not required for spontaneous homologous recombination-mediated DNA deletion. J. Nucleic Acids. , (2010).
  5. Claybon, A., Karia, B., Bruce, C., Bishop, A. J. PARP1 suppresses homologous recombination events in mice in vivo. Nucleic Acids Res. , (2010).
  6. Bishop, A. J. p53-, and Gadd45a-deficient mice show an increased frequency ofhomologous recombination at different stages during development. Cancer Res. 63, 5335-5343 (2003).
  7. Bodenstein, L., Sidman, R. L. Growth and development of the mouse retinalpigment epithelium. Part I. Cell and tissue morphometrics and topography of mitoticactivity. Dev Biol. 121, 192-204 (1987).
  8. Burke, J. M. Epithelial phenotype and the RPE: is the answer blowing in the Wnt?. Prog Retin. Eye Res. 27, 579-595 (2008).

Play Video

Cite This Article
Claybon, A., Bishop, A. J. R. Dissection of a Mouse Eye for a Whole Mount of the Retinal Pigment Epithelium. J. Vis. Exp. (48), e2563, doi:10.3791/2563 (2011).

View Video