在小鼠永久性大脑中动脉结扎术中的应用

Summary

大脑中动脉（MCA）结扎是一种技术，研究在动物模型局灶性脑缺血。在此方法中，通过开颅暴露大脑中动脉和烧灼结扎。此方法提供了高度重复性的脑梗死体积和增加手术后的生存率率比现有的其他方法。

Abstract

局灶性脑缺血之间看到中风患者最常见的类型。由于临床意义出现了长时间的努力，制定合适的动物模型研究缺血期间开展的活动。这些技术包括短暂或永久的，局灶性或全球的许多不同的动物模型，使用最常见的啮齿类动物的缺血模型。

永久性MCA结扎的方法，这也是在文献中提到pMCAo，被广泛使用作为一个在^啮齿类动物中1-6局灶性脑缺血模型。这种方法最初是老鼠田村等。在1981年^7。开颅手术是在这个协议用于访问由电闭塞MCA和近端地区。梗死涉及大多是皮层和纹状体有时的地区，根据闭塞的位置。现在这项技术是建立和使用在许多实验室^8-13。早期使用这种技术的定义和描述的"梗塞核心"和"半影^"14日至16日，它往往是用来评估潜在的神经保护作用^{的化合物10，12，13，} 17。虽然最初的研究是在大鼠进行的，永久的马华结扎已成功地^使用在18-20稍作修改的小鼠。

这种模式产生重现梗死和增加后的存活率。在人类缺血性中风的约80％发生在MCA ^面积 21，因此这是一个中风的研究非常相关的模型。目前，中风患者提供有效的治疗方法缺乏，因此需要有一个很好的模式，来测试潜在的药理的化合物和评估生理成果。这种方法也可以用于研究体内细胞缺氧反应机制。

在这里，我们目前在C57/BL6鼠标MCA结扎手术。我们描述的术前准备，马华结扎手术和2,3,5 - 三苯基氯化四氮唑（TTC）染色脑梗死体积的定量。

Protocol

该协议被批准用于对动物研究的伦理（UCAR）的大学罗切斯特委员会。在协议应遵循无菌技术。无菌手套和口罩的使用是必需的。

表1描述了所有的设备，材料，化学品，并在协议使用工具。

1。手术前准备

1. 注入小鼠皮下丁丙诺啡（0.05mg/kg），术前2小时后，立即手术，然后在第一个24小时后手术期每​​3-5 h。
2. 高压灭菌器消毒所有的手术器械，纱布海绵，棉花尖端涂药。在手术期间和无菌纱布上空气干燥之前使用的手术工具保持在70％的乙醇。喷雾用70％乙醇的工作区。
3. 3％isofluorane - 20％的氧气混合气体麻醉使用麻醉蒸发器的鼠标。调整流量计的氧气量。测试脚趾或尾巴捏（他们应该反应迟钝）的麻醉水平。维持麻醉用2％（V / V）isofluorane的水平。
4. 应用人工泪液鼠标的眼睛和使用注意事项，以避免损坏的眼睛在手术过程中。在外侧的位置，放置在其右侧的鼠标。
5. 剃须面积之间的左眼和使用动物快船队的左耳朵基地的左侧。优碘溶液和70％的乙醇使用棉花尖端涂药，轻轻揉面积之间交替清洗的区域。必要时重复。
6. 放在鼠标连接到直肠探头体温保持在37 ° C的加热垫使用矿物油插入直肠探头。
7. 鼠标和定位在其右侧，在显微镜下，用胶带固定。剪下一个窗口，并在纱布覆盖手术区。

Discussion

永久性MCA结扎方法给予高度重复性的脑梗死体积和增加手术后的生存率率比现有的其他方法。程序的难易程度和持续时间短（约30分钟），使其更加实用。该方法被广泛用于在小鼠和大鼠。

这种方法需要一个立体显微镜下微创手术。因此，在显微镜下操作和完善一个成功的开颅手术的经验是必不可少的。最好是建立在实验室进行实验前，一致梗死。为了实现可重复性的结果是很重要结扎在马华每次相同的确切位置。马华应结扎近端豆​​纹皮质下梗死所需的分行。是完全结扎动脉闭塞是永久性的。因此，这种模式不允许再灌注通过MCA。虽然不包括在此演示，它是最好的，如果使用多普勒探头是测量血流量，以验证在受影响地区完成结扎动脉。

经营者应非常小心，不要损坏或穿刺马华，同时揭露和混凝动脉。开颅手术应具有广泛的服务，以防止任何损害颧骨。由于手术区是非常接近的梗塞面积，皮质表面造成任何损害，应避免在开颅手术或烧灼。福斯特18015-00 cateurizer单位或双极cateurizer可以使用，而不是在此演示中使用的福斯特18000-00。福斯特18015-00允许用户调整温度的c.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
名称	公司联系号码
答:解决方案和化学品
碘伏溶液擦洗手术	Aplicare，82-209
70％的乙醇	Koptec，V1001
2,3,5 - 三苯基氯化氮唑（TTC）	西格玛，T8877
4％多聚甲醛	电子显微镜学，159SP
磷酸盐缓冲生理盐水，pH值:7.4	在实验室中制造和消毒。
矿物油	PML的Microbiologicals，R6570
Isofluorane	巴特勒公司，029405
丁丙诺啡（0.3mg/ml）	Hospira公司，NDC 0409-2012-32
人工泪液	巴特勒公司，007312
恢复凝胶	清除H 2 O 72-01-5022
B.手术材料和设备
C57/BL6鼠标，10至12周岁	殖民地大学动植物公园饲养
100％的氧气罐	公司Airgas
麻醉蒸发器和流量计	Surgivet，型号100
直肠探头的加热垫	精细的科学工具，TR200
解剖显微镜	2000年蔡司，STEMI
加热板	PETCO服务有限公司0307-013
小血管Cauterizer集	精细的科学工具，18000-00
迷你蠕动泵	哈佛器械，MPII
1ml注射器	屋宇署，329650
18G针	Becton Dickinson公司，305196
手术5.0尼龙缝线	Ethilon，698H
切片座	肯特科学，1毫米
单边刀片	电子显微镜学，71962
标签胶带	Scienceware，倍儿最先进的产品F13463 - 2075
纱布垫	肯德尔Curity 2252，约翰逊和约翰逊6415
棉花提示喷枪	清教徒806 - WCL
C.手术工具
手术弹簧剪刀	精细的科学工具15003-08
Microdissecting钳角度	精细的科学工具5 / 45
Microdissecting钳弯曲	精细的科学工具5钛
细直剪	精细的科学工具14568-12
曲骨咬骨钳	精细的科学工具16021-14
哈特曼止血钳弯	精细的科学工具13003-10