הניסוי בבעלי חיים אושרה על ידי משרד וטרינרית הקנטון (ציריך, שוויץ). השיכון הפרוצדורות היו בהתאם לחוק הגנת בעלי חיים השוויצרי ומתאימים הדירקטיבה האירופית להגנה על בעלי חיים למטרות מדעיות (2010/63/EU הנחיה של הפרלמנט האירופי ושל המועצה של 22 ספטמבר 2010). 1. טרום ניתוחית שיקולים 1.1 עכברים: דרישות דיור, מצב כללי ניטור בריאות מומלץ עכברים נמסר מיצרנים או להעביר ממושבות מכרסם חיצוני צריכים להגיע במתקן דיור לפחות שבועיים לפני הניתוח. תקופה זו אמורה לאפשר החיות להסתגל לסביבה החדשה ספציפי המתקן תנאי דיור. עכברים, כמו בעלי חיים חברתיים, יש שיכנו בקבוצות תואם בתקופה זו הסתגלות. עבור ניטור ברמה של הפרטמזון צריכת המים, כל עכבר שוכן לחוד עד 10 ימים לאחר ההשתלה משדר כירורגית מ 3 ימים לפני הניתוח. קו הזמן להקמת telemetric-משדר נושאות עכברים מוצג באיור 1. זה חיוני כי החיות לבוא ניתוח בבריאות במצב טוב. לכן, לפני ניתוח, בעלי חיים צריכים להיות במעקב פעם במשך 2-3 ימים לגבי מצבו הכללי ליום (, הופעה יציבה, התנהגות ספונטנית) כמו גם משקל הגוף, מזון צריכת המים. נתונים אלה מתועדים על שיא רפואי (תנאי כללי ניטור בריאות גיליון נתונים, טבלה 1) לקבוע רמות הבסיס היחיד של המצב הכללי והבריאות רווחתם הכללית. חיות כל מראה תסמינים של מחלה או מצב כללי לקוי לפני הניתוח צריך להיות מחוץ הניסוי. 1.2 גזירת שיער בבית יום אחד לפני הניתוח יום לפני ההשתלה, כדי לגלח את עניםals לניתוח, עכברים הם בקצרה הרדים בתוך תא קטן פרספקס (8x8x8cm) באמצעות sevoflurane (8%) או isoflurane (5%) ב חמצן טהור (600 mL / min). אחרי ההפסד של רפלקס ליישר, העכבר הוא נלקח מתוך החדר ואת השיער הקדמי צוואר בטן נחתך עם החיה שוכב recumbence הגבי; הרדמה נשמרת למשך כ 5 דקות עם מסיכת אף עם 3-4% sevoflurane או isoflurane 1.5-3% חמצן טהור בקצב זרימה של 600 mL / min. לאחר גזירת השיער, בעלי חיים רשאים להתעורר מובאים ואז בחזרה לכלוב ביתם. 2. השרשה 2.1 סביבת הפעלה, הכנת המשדר telemetric ביום ההשתלה, כל הנהלים בדבר הכנת משדר וניתוחים מבוצעים על ספסל לעבוד עם ברדס זרימה למינרית מצויד מיקרוסקופ כירורגי. התנאים אספטי מובטח על ידי שימוש instrum autoclavedלהורים וחומרי חיטוי ועל ידי חיטוי הספסל עבודה 7. לפני ההשתלה, משדרי telemetric (ETA-F10, נתונים מדעי בינלאומי, סנט פול, מינסוטה, ארה"ב) מוכנים הראשון. לאחר הסרת מהחבילה סטרילי שלהם, מוביל של המשדר הם קיצרו את אורך מתאים לגודל של העכבר כדי להיות מושתל. ברוב של עכברים outbred או מולדת למבוגרים, האלקטרודה אדום עשוי להתקצר כ 42 מ"מ ו – האלקטרודה לבן / צבע באורך של כ 55 מ"מ. בידוד צינורות יוסר החלק (חושית) הדיסטלי של מוביל: כ -20 מ"מ של צינורות יוסר האלקטרודה אדום, כ -10 מ"מ של צינורות יוסר האלקטרודה לבן / צבע. החלק הדיסטלי של כל אלקטרודה (שהיא עכשיו ללא צינורות) נוצר ללולאה על ידי תיקון בסוף עם התפרים משי דקים (PERMA-Handseide, 6-0, Ethicon, Norderstedt, גרמניה). לאחר הכנת את האלקטרודות, המשדר ממוקם waתמיסת מלח סטרילית rm מוכן להיות מושתל כאשר החיה הוא מורדם ומוכן בניתוח. 2.2 הרדמה ב 5-10 דקות לפני אינדוקציה של הרדמה משאיפת, תערובת של midazolam (4 מ"ג / ק"ג) ו – פנטניל (0.04 מ"ג / ק"ג) מנוהלים תת עורי כמו premedication, ובכך לספק הרגעה ו מנע כאבים. הרדמה כללית היא שאיפה המושרה על ידי הצבת חיה בחדר אינדוקציה מציגה את סוכן הרדמה נדיפים (% sevoflurane או 8% isoflurane 5 דקות בתוך טהור 600 מ"ל חמצן /). כאשר החיה מציגה הפסד של רפלקס ליישר זה מועבר הספסל לעבוד מתחת למכסה המנוע זרימה למינרית, והושמו recumbence הגב על צלחת מתכת שתוכנן במיוחד מצויד מסכת האף ואת צינורות מן המנגנון הרדמה. הרדמה מתוחזק על ידי נשימה ספונטנית (3-4% sevoflurane או isoflurane 1.5-3% חמצן טהור בקצב זרימה של 600 mL / min). במהלך הרדמה עין, של החיהזה מוגנים עם משחה (ויטמין A, Baush & Lomb, Steinhausen, שוויץ). בשכיבה על צלחת מתכת החי הוא חימם את פני השטח על ידי מים באמבטיה מחוממת (39 ° C + / -1) של הספסל עבודה. 2.3 ניתוח העור באזור הצוואר הבטן הקדמי הוא לחטא עם אתנול 70%. 1 – חתך עד 1.5 ס"מ באורך בעור עשוי החזה התחתון לאורך קו האמצע אל הבטן. להוביל שלילי (לבן / צבע) הוא המחילות מתחת לעור מבית החזה עד הצוואר, שם חתך קטן (≤ 0.5 ס"מ) הוא עשוי בכיוון האורך. העור ורקמות הבסיסית מוכנים לפנות מקום קיבעון של לולאת תיל של האלקטרודה. לולאת תיל קבוע בין שרירי הממוקם בצד ימין של קנה הנשימה, באמצעות שני תפרים משי דקים (PERMA-Handseide, 6-0, Ethicon, Norderstedt, גרמניה). הפצע בצוואר סגור אז עם התפרים נספגים (VICRYL 6-0, Ethicon, Norderstedt, גרמניה) בשכבות. דופן הבטן היא פתחה אז את linea alba והגוף של משדר telemetric מושם לתוך חלל הבטן של העכבר. לולאת תיל של האלקטרודה (אדום) חיובית sutured לתהליך xiphoid עם התפרים משי באופן כזה שהוא נמצא בין הכבד לבין הסרעפת באזור הבטן השמאלית העליונה (איור 2). לאחר מכן, שכבות השריר באזור הבטן סגורים עם התפרים נספגים (VICRYL 6-0, Ethicon, Norderstedt, גרמניה). לפני סוף סגירת דופן הבטן, תערובת של Sulfadoxin ו וטרימטופרים [(30 מ"ג / ק"ג ו – 6 מ"ג / ק"ג, בהתאמה; מומס 1 מ"ל של תמיסת מלח (0.9%) ו – כ בטמפרטורת הגוף (38-39 מעלות צלזיוס)] מוזרק לתוך חלל הבטן לצורך טיפול מונע אנטי זיהומיות ולתמוך הומאוסטזיס נוזל. לבסוף, העור באזור הבטן משוחזר עם סיכות (Precise, 3 Care M הבריאות, סנט פול, מינסוטה, ארה"ב). 3. הטיפול שלאחר הניתוח לאחר השלמת הניתוח, ההרדמה, 0.1 מ"ג / ק"ג של עצירות (Temgesic, Essex Chemie AG, לוצרן, שוויץ) ו – 5 מ"ג / ק"ג של meloxicam (Metacam, Boehringer Ingelheim, באזל, שוויץ) מנוהל תת עורי לטיפול בכאב, ו החיות נשארות על חם (39 ° C + / -1) פני הספסל עבודה להתאושש כ 2h. יחד עם הקלה על כאב (פעמיים ביום: עצירות, 0.1 מ"ג / ק"ג ו meloxicam 5 מ"ג / ק"ג), טיפול תומך המורכב גלוקוז 300 μL (5%) ו – 300 μL מלוחים (0.9%) חימם את טמפרטורת הגוף, מוחל תת עורי פעמיים ביום למשך 4 ימים. לקבלת תמיכה התאוששות נוספת, כדאי לספק את החיות עם בקבוק שתייה נוסף המכיל פתרון גלוקוז 15%. במהלך תקופת ההתאוששות של 40-10 ימים, מומלץ כי בעלי החיים נשמרים חמים. לכן, במקרה שלנו, העכברים הם שוכנו בארון ההתחממות (30 ° C + / – 1). מעקב אחר המצב הכללי ומשקל הגוף, כמוגם צריכת מזון ומים, מתבצע פעם אחת ביום על פי מצבו הכללי ניטור בריאות גיליון נתונים (טבלה 1) במשך 10 ימים שלאחר הניתוח. נקודות הקצה ההומאנית, כלומר הקרבת בהמה, כדי למנוע סבל וכאב מיותרים, ואם התקדמות ההחלמה אינו משביע רצון, הם הבינו תחת התנאים הבאים: אם מצבו הכללי עניים, כלומר החיה הוא אדיש באופן משמעותי (אין תנועה לאחר נגע / דחף) משטח הגוף שלה מרגיש קר למרות ההתחממות, בעל החיים צריך להיות euthanatized מיד. אם, ביום 4 לאחר ההשתלה משדר, החיה מראה סימנים ברורים של אדישות, הוא מאוד אגרסיבי או לא מראה שום צריכת המזון, היא צריכה להיות euthanatized מיד. ביום 8 לאחר ההשתלה משדר, בעל החיים צריך להציג עלייה ברורה במשקל הגוף בהשוואה שלאחר הניתוח בימים שקדמו. יתר על כן, יש לצרוך בכל lמזרח 80% מצריכת טרום ניתוחית המזון היומית. אם אחד מהתנאים הללו לא מתקיים, בעל החיים צריך להיות euthanatized מיד. ב 10 ימים לאחר ההשתלה, החיה מועברת לחדר חיה בתנאים דיור סטנדרטית. העכברים צריכים להיות שוכנו קבוצות תואם כדי לאפשר אינטראקציה חברתית כדי למנוע את ההשפעות השליליות של דיור לטווח ארוך בודדים, אשר יכולה להיות השפעה משמעותית על קריאה מתוך הניסויים הבאים 8, 9. עכברים צריך תקופת החלמה לפחות 4 שבועות לאחר ההשתלה משדר לפני הניסוי הראשון נערך ורכישת נתונים מתחיל. 4. נתונים רכישה איסוף הנתונים הוא שיזם נגיעה חיה עם מגנט, ואז את המשדר מופעל. Dataquest לאמנות תוכנה (Data מדעי בינלאומי, סנט פול, מינסוטה, ארה"ב) הקואורדינטות, זיהוי איסוף, ניתוח גר 'מצגת aphical (בצורה של צורות הגל) של אותות אחד או יותר בעלי חיים. תוכנית רכישת אוספת אותות הנתונים הנשלחים אל המחשב מן הממירים ומקלטי באמצעות חילופי נתונים מטריקס (Data מדעי בינלאומי). תוכנית זו יכולה לאסוף נתונים לאורך זמן מסוימת במרווחי זמן קבועים או מדגם ברציפות לשמור את הנתונים על הכונן הקשיח של המחשב. כאשר טווח ואיכות האות הנפלט תלוי בחום על הרכב החומר של הכלוב וציוד שמסביב (למשל לעומת פלסטיק מתכת), הוא הציע את הצלחת מקלט ממוקם קרוב החיה ככל האפשר, למשל תחת בעלי חיים בכלוב או מעל ספסל ניסיוני, אזור במעבדה למשל או הליכון. מומלץ כי התצורה הנכונות של מערכת הקלטת נתונים השידור להיבדק על ידי ביצוע בדיקה קצרה של מדידות בזמן אמת במצב דגימה רציפה. לאחר הנתונים נאספו ואוחסנו, הם יכולים להיות עלילהטד, המפורטים ונותחו עבור מגוון רחב של פרמטרים שונים באמצעות תוכנית ניתוח. פרטים על תצורת מערכת הקלטה (למשל הגדרת הדגימה מודוס), וכן תוכנת ניתוח (למשל עבור קצב לב בפרמטרים השתנות, PQ מרווח ואת מרווח QT הוקמה מתוך biopotential / א.ק.ג. עקומות) ניתן למצוא מדריכים של היצרן. רמזים יקרי ערך לתכנון ביומטריים שיטות סטטיסטיות שימושי עבור רכישת נתונים לפרשנות telemetric ו מתפרסמים במקום אחר 3. 5. נציג תוצאות: התוכנית הכוללת של ההליך המתואר מוצג באיור 1. המיקום של המשדר מושתל, כולל המיקום של האלקטרודות לקבלת biopotentials מהלב (חד להוביל ECG) מוצג באיור 2. דוגמאות של נתונים גולמיים עקומות biopotential קצר טווח (אחד להוביל ECG), לטווח ארוך קצב הלב, טמפרטורת הגוף הליבה בפעילות של תנועה הקלטות של הפרטעכברים ניתנים איור 3 ואיור 4, בהתאמה. איור 5 נותן דוגמה של נתונים שפורסמו מתוך לטווח ארוך מדידות קבוצות של עכברים לאחר ניסוי. מספר פרמטרים אחרים ניתן לקבוע מן עקומות biopotentials. דוגמאות להצגה של השתנות קצב הלב פרמטרים 5, מרווח QT ו PQ מרווח 10, 11 מתפרסמים במקום אחר. טבלה 1. מצב כללי ניטור בריאות גליון נתונים. לחץ כאן כדי להוריד את הסדין. תבנית זו מקלה על ניטור של מצב כללי העכבר של הפרט ועל בריאות. בדיקה Baseline ההופעה של חיה, יציבה, התנהגות ספונטנית, כמו גם קביעת משקל הגוף, צריכת מזון ומים יש להקים לפני ניתוח ההשתלה פעם למשך 3 ימים ליום. השוואה של קביעות המחקר עם אלו המתקבלותביום למשך 10 ימים לאחר הניתוח לשמש כדי להעריך את התקדמות ההחלמה שלאחר הניתוח. בנוסף, לאחר הניתוח וטיפול בכאב מתועדים היטב בצורה של רשומה רפואית. הוראות על הקצה אנושי ניתנות על מנת להקל על החלטות אם העכבר צריך להקריב כדי למנוע כאב וסבל מיותרים, אם החיה אינה עומדת בקריטריונים של התאוששות מהירה לאחר ההשתלה. באיור 1. לו"ז להקמת telemetric-משדר נושאות עכברים. לפי הסדר הכרונולוגי של נהלים הנוגעים ההשתלה של משדר מראה את נקודות הזמן בהן עכבר יכול לשמש ניסויים רכישת נתונים. 2. איור תצלום רנטגן / סקיצה של מיקום המראה telemet מושתלר"י משדר. גופתו של המשדר ממוקם בחלל הבטן. להוביל חיובי נוצר לתוך לולאת תיל קבוע לתהליך xiphoid עם תפרים. להוביל שלילי מנהרה תת עורית של בית החזה עד הצוואר קבוע כמו לולאה חוט בין השרירים הבא ישירות לקנה הנשימה. תצלום רנטגן נלקח הפרסום הקודם של המחברים בחיות מעבדה 9. באיור 3. עקומות biopotential. תדפיס גלם של אחד להוביל עקומות א.ק.ג. מכל עכבר המודע של החיה אותו תחת הרדמה משאיפת עם sevoflurane. קצב לב מחושב באופן אוטומטי על ידי מערכת טלמטריה. רצף 3 שניות נרשם תחת הרדמה מצביע על קצב לב של 440 פעימות לדקה. עקומת נרשם עכבר המודע מראה קצב לב של 660 פעימות לדקה, אשר נופל בטווח צפוי קצב הלב במהלך מצבפעילויות גופניות כגון קצב הטיפוח או אכילה. מ biopotential / חד להוביל עקומות א.ק.ג., קצב הלב פרמטרים השתנות, מרווח interbeat ו PQ ומרווחי QT ניתן להקים עם השימוש בתוכנה של היצרן. איור 4. נתונים גולמיים לטווח ארוך מדידות אצל עכברים בריאים וחולים. קצב לב (BPM), טמפרטורת הגוף הליבה (° C) לבין פעילות של תנועה (ספירות) נמדדים בזמן עכברים הם שוכנו בנפרד ללא הפרעה כלשהי מהנהלים גבר או ניסיוני בכלוב ביתם. קצב הלב נרשם למשך 30 שניות כל 5 דקות (תדר הדגימה 1000 הרץ). טמפרטורת הגוף Core הוא דגימה של 10 שניות כל 5 דקות. פעילות של תנועה מתועדת ברציפות המאוחסן ב 5 דקות intervals. חמש דקות נקודות נתונים הם איתר עבור 6.5 ימים. המדידות telemetric מתועדים שלושה עכברים עם שונותמצבים גופניים. העכבר מראה בריא מקצב צירקדי ברור עם עליות נורמלי בערכים פיזיולוגיים והתנהגות פעילות של תנועה במהלך שלב (לילה) כהה. לעומת זאת, לאחר ניתוח גדול, קצב לב מוגבר, במיוחד בשלב היום, ופעילות של תנועה הוא מדוכא. עכבר third סבלה כרוני בקצב הגידול שלה מחלות היממה של קצב הלב ואת טמפרטורת הגוף הליבה נראה שטוח, ופעילות של תנועה היא פחתה. נציג נתונים של מדידות קצב הלב (ערכים נורמליים לאחר ניתוח גדול) לקוחים מתוך הפרסום הקודם של המחברים ב Altex 12. איור 5. דוגמה של הצגת תוצאות לטווח ארוך מדידות טלמטריה לאחר ניסוי. הנתון נלקח הפרסום הקודם של המחברים בחיות מעבדה 1. כניסוי למופת, isofl 50 דקותהרדמה urane או sevoflurane בוצעה. ההשפעה ארוכת הטווח של חומרי הרדמה על קצב הלב, טמפרטורת הגוף הליבה בפעילות של תנועה אחרי החיות היו ערים הושווה. באמצעות משדר 16-מושתל עכברים, נתונים telemetric נרשמו שמונה עכברים לכל הרדמה בעוד החיות היו חד שוכנו ואיפשר לשוטט בחופשיות בכלובים בביתם. לצורך ניתוח של ההשפעות ארוכות הטווח postanesthetic, לקחנו בחשבון כי הערכים משתנים מאוד במהלך מחזור של 24 שעות מאז עכברים פעילים בעיקר בלילה. לכן, פירושו של ערכי telemetric עבור כל חיה חושבו בנפרד עבור הלילה (12 שעות חושך) יום (12 שעות אור) שלבים. ערכים נורמליים של הפרט הוקמו על ידי חישוב פירושו של שלושה ימים לפני הרדמה. במשך כל יום אחרי הרדמה, כלומר שלב האור והחושך היה בהשוואה לערכים נורמליים של הפרט, וכתוצאה מכך ערכי הדלתא. לכן, הערכים מייצגים דלתא סטייה ערכים תקינים (שהוקמו לפניכדי הרדמה) ב 12 שעות ביום המקביל זמן לילה. עמודות מייצגים את ממוצע משמונה עכברים, ברים מצביעים סטיית התקן. כוכביות מצביעים על משמעות P ≤ 0.05 (אחד דרך ניתוח שונות להשוואה אמצעי קבוצה בכל אחד ארבעה ימים לאחר הרדמה עם ערכים נורמלי).