A طريقة لوصفها الأوعية الدموية في الفئران الجنينية
Summary
هذه المقالة طريقة لوصفها الجلد والأوعية الدموية الجنينية الغدة الصعترية.
Abstract
إنشاء شبكة الأوعية الدموية الوظيفية هو جزء أساسي من توالد الأعضاء، ومطلوب من أجل وظيفة الجهاز الأمثل. على سبيل المثال، في تشكيل الأوعية الدموية السليمة الغدة الصعترية والزخرفة أمر ضروري لدخول خلية توتية في الجهاز وناضجة الخلايا T-الخروج إلى المحيط. الترتيب المكاني للأوعية الدموية في الغدة الصعترية يعتمد على إشارات من المكروية المحلية، وهي الخلايا الظهارية الغدة الصعترية (TEC). التقارير الأخيرة تشير إلى أن العديد من تعطيل هذه النتائج في الغدة الصعترية إشارات عيوب الأوعية الدموية 1،2. وقد وصفت دراسات سابقة التقنيات المستخدمة لتسمية المواليد والأوعية الدموية الغدة الصعترية الكبار 1،2. نبين هنا تقنية لوصفها الأوعية الدموية في الغدة الصعترية الجنينية. هذا الأسلوب يجمع بين استخدام FITC-ديكستران أو غريفونيا (Bandeiraea) Simplicifolia I كتين (GSL 1 – isolectin B 4) حقن الوريد الوجه والجسم المضاد تلطيخ CD31 لتحديد الغدة الصعترية فاهياكل scular وPDGFR β-لتسمية الغدة الصعترية حول الأوعية اللحمة المتوسطة 3-5. وتقدم أيضا خيار استخدام cryosections أو أقسام vibratome. ويمكن استخدام هذا البروتوكول لتحديد العيوب الأوعية الدموية الغدة الصعترية، وهو أمر حاسم لتحديد أدوار جزيئات TEC المستمدة من الغدة الصعترية في الدم تشكيل السفينة. كأسلوب تصف الأوعية الدموية بأكملها، فإنه يمكن أيضا أن تستخدم لتحليل الشبكات الأوعية الدموية في عدة أعضاء وأنسجة الجنين بما في ذلك في جميع أنحاء الجلد والقلب 6-10.
Protocol
Discussion
جبل كامل وPECAM 1-(CD31) على تلطيخ أقسام هي الأساليب التقليدية لوصفها الأوعية الدموية في الفئران الجنينية. هذه الأساليب تتطلب استخدام المناعي المباشر و / أو غير المباشرة، والمنظفات لpermeabilize الأنسجة الماوس. هذا يبرهن على أن تكون عملية في الوقت المناسب إلى حد ما. هنا، لقد است?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وأيد هذا العمل من قبل أعداد منحة R01AI055001 وR01AI082127 من NIAID لإدارة الموارد الطبيعية وSREB جائزة الزمالة لأطروحة JLB.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number |
|---|---|---|
| FITC-dextran | Sigma | FD150S-1G |
| Fluorescein labeled GSL 1 – isolectin B4 | Vector Laboratories | FL-1201 |
| Fast Green | MP Biomedicals | 195178 |
| PFA | Fluka | 76240 |
| Fetal Bovine Serum | Atlanta Biologicals | S11550 |
| Optimal Cutting Temperature Compound (O.C.T. | VWR | 25608-930 |
| Acetone | JT Baker | 9006-33 |
| Donkey Serum | Jackson | 017-000-121 |
| rat anti-mouse CD31, | BD Pharmingen | 558736 |
| goat anti-mouse PDGFR-β | R&D Systems | AF1042 |
| donkey anti-rat CD31 Alexa 647 (Invitrogen) | Biolegend | 102516 |
| donkey anti-goat Alexa 594 (Invitrogen) | Invitrogen | A11058 |
| Triton X -100 | Sigma-Aldrich | X-100 |
| Low melt agarose/PBS | Sigma-Aldrich | A9414-25G |
| Methanol | Fisher Scientific | A413-4 |
| Benzyl Alcohol | Acros Scientific | 148390010 |
| Benzyl Benzoate | Acros Scientific | 105860010 |
| Depression slides | Fisher Scientific | S175201 |
| Fluorogel | Electron Microscopy Sciences | 17985-10 |
| Cover Glass (22X22)-1.5 | Thermo Scientific | 152222 |
| Zeiss LSM 510 Meta Confocal Microscope | Zeiss | |
| Micro dissecting forceps | Roboz | RS-5135 |
| Parafilm No. OM992 | Fisher Scientific | 13-374-16 |
| 12 and 24 well microplates | Evergreen Scientific | 222-8044-01F |
| Superfrost/Plus Microscope Slides | Fisher Scientific | 12-550-15 |
| 4mL clear vials | National Scientific | B7800-2 |
References
- Cuddihy, A. R. VEGF-mediated cross-talk within the neonatal murine thymus. Blood. 113, 2723-2731 (2009).
- Muller, S. M. Gene targeting of VEGF-A in thymus epithelium disrupts thymus blood vessel architecture. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 102, 10587-10592 (2005).
- Muller, S. M. Neural crest origin of perivascular mesenchyme in the adult thymus. J. Immunol. 180, 5344-5351 (2008).
- Foster, K. Contribution of neural crest-derived cells in the embryonic and adult thymus. J. Immunol. 180, 3183-3189 (2008).
- Liu, C. Coordination between CCR7- and CCR9-mediated chemokine signals in prevascular fetal thymus colonization. Blood. 108, 2531-2539 (2006).
- Lavine, K. J. Fibroblast growth factor signals regulate a wave of Hedgehog activation that is essential for coronary vascular development. Genes Dev. 20, 1651-1666 (2006).
- Lavine, K. J., Kovacs, A., Ornitz, D. M. Hedgehog signaling is critical for maintenance of the adult coronary vasculature in mice. J. Clin Invest. 118, 2404-2414 (2008).
- Mukouyama, Y. S., Gerber, H. P., Ferrara, N., Gu, C., Anderson, D. J. Peripheral nerve-derived VEGF promotes arterial differentiation via neuropilin 1-mediated positive feedback. Development. 132, 941-952 (2005).
- Mukouyama, Y. S., Shin, D., Britsch, S., Taniguchi, M., Anderson, D. J. Sensory nerves determine the pattern of arterial differentiation and blood vessel branching in the skin. Cell. 109, 693-705 (2002).
- Murphy, P. A. Endothelial Notch4 signaling induces hallmarks of brain arteriovenous malformations in mice. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 105, 10901-10906 (2008).
