Miltenyi MAC kiti kullanılarak lenfositlerin İzolasyon tüm lenfoid doku homojenatlarında hücreleri arındırmak için güvenilir bir yol. Miltenyi sistemini kullanarak saflaştırılmış Hücreler genellikle ≥% 96 saf. Burada, CD4 + T hücreleri, Miltenyi tarafından sunulan birçok kitleri biri izole etmek için atılan adımları göstermektedir.
Abstract
Birincil kaynak hücrelerin izolasyonu çok daha karmaşık protokoller gerekli bir adımdır. Miltenyi, insanlar, insan olmayan primatlardan, sıçan ve biz burada açıklamak gibi, fare dahil olmak üzere çeşitli organizmalar hücreleri izole etmek için kitleri sunmaktadır. Pozitif seçimi (veya hücre kaybı) yanı sıra olumsuz seçim ya boncuk tabanlı Manyetik hücre ayırma sağlar. Burada, biz, bakir ya da na ve CD4 + yardımcı T hücreleri olumsuz seçim göstermektedir. Biz genellikle ≥% 96 saf CD4 + / CD3 + hücrelerden arındırmak bu standart protokolü kullanarak. Bu protokol, protokol Diseksiyon ve T hücreleri ve diğer hücre tipleri adoptively görüntüleme amaçlı transfer saflaştırılması, Jüpiter 7. sorunu yayınlanan Fare Periferik lenf düğümleri, 2-Foton Görüntüleme ile birlikte kullanılır. Bu protokol video FACS analiz göstermek olmasa da, son derece izole hücrelerinin FACS üzerinden uygun antikorları kullanarak genel saflığını kontrol etmek için tavsiye edilir. Buna ek olarak, T hücre izolasyonu steril olmayan bir yöntem gösterilmektedir. Eğer steril hücreleri belirli bir son kullanıcı uygulaması için gerekli olan, tüm doku kültürü kaputu göstermiştir prosedürleri standart steril koşullar altında yapmak istediğinizden emin olun. Kendi deneyleri ile izlemek ve iyi şans için teşekkür ederiz!
Protocol
Lütfen okuyun ve uygulayın Miltenyi kiti veya çevrimiçi dahil protokol http://www.miltenyibiotec.com/ .
Discussion
Birincil kaynak hücrelerin izolasyonu çok daha karmaşık protokoller gerekli bir adımdır. Miltenyi, insanlar, insan olmayan primatlardan, sıçan ve biz burada açıklamak gibi, fare dahil olmak üzere çeşitli organizmalar hücreleri izole etmek için kitleri sunmaktadır. Pozitif seçimi (veya hücre kaybı) yanı sıra olumsuz seçim ya boncuk tabanlı Manyetik hücre ayırma sağlar. Burada, biz, bakir ya da na ve CD4 + yardımcı T hücreleri olumsuz seçim göstermektedir. Biz genellikle ≥% 96 saf CD4 + / CD3 + hücrelerden ar…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Rebecca Paquett MACS tamponunun hazırlanması için teşekkür etmek istiyorum.
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
MACS Buffer
Reagent
None
None
Prepare as described by Miltenyi.
CD4+ T cell Isolation Kit: Untouched Isolation
Reagent
Miltenyi
130-090-860
For use with the Miltenyi system.
Sterile Phosphate-Buffered Saline (PBS)
Reagent
For use in the preparation of MACS buffer.
Corning 35mm Not TC-Treated Culture Dish
其他
Corning Cell Culture Surfaces
430588
Used in the preparation of a single cell suspension.
70 micron Cell Strainer
Tool
BD Falcon
352350
Used in the preparation of a single cell suspension.
6 mL Syringe
Tool
Tyco Healthcare
8881516051
Used in the preparation of a single cell suspension.
Matheu, M. P., Cahalan, M. D. Isolation of CD4+ T cells from Mouse Lymph Nodes Using Miltenyi MACS Purification. J. Vis. Exp. (9), e409, doi:10.3791/409 (2007).