Der Grad der vaskulären Dysfunktion beitragen und physiologischen Mechanismen können bei Patienten mit chronischer Nierenerkrankung durch Messen brachialis flussabhängigen Dilatation Aortapulswellengeschwindigkeit und vaskuläre Endothelzellen-Protein-Expression zu beurteilen.
Patienten mit chronischer Nierenerkrankung (CKD) haben deutlich erhöhtes Risiko für Herz-Kreislauf-Erkrankungen (CVD) im Vergleich zu der allgemeinen Bevölkerung, und das ist nur teilweise durch CVD traditionellen Risikofaktoren erläutert. Vaskuläre Dysfunktion ist ein wichtiger nicht-traditionellen Risikofaktor, gekennzeichnet durch den vaskulären endothelialen Dysfunktion (am häufigsten als beeinträchtigte Endothel-abhängige Dilatation [EDD] beurteilt) und Versteifung der großen elastischen Arterien. Während verschiedene Techniken existieren, um EDD und großen elastischen Arteriensteifheit, beurteilen die am häufigsten verwendet werden, sind Oberarmarterie flussvermittelte Dilatation (FMD BA) und Aorten-Pulswellengeschwindigkeit (aPWV) sind. Beide nicht-invasive Maßnahmen der vaskulären Dysfunktion sind unabhängige Prädiktoren für zukünftige kardiovaskuläre Ereignisse bei Patienten mit und ohne Nierenerkrankung. Patienten mit CKD zeigen sowohl eingeschränkter MKS-BA und erhöhte aPWV. Während die genauen Mechanismen, durch die vaskuläre Dysfunktion Entlops in CKD sind unvollständig verstanden, erhöhten oxidativen Stress und eine anschließende Reduzierung der Stickoxid (NO) Bioverfügbarkeit wichtigen Beitrag. Zelluläre Veränderungen im oxidativen Stress kann durch das Sammeln von vaskulären Endothelzellen aus der Antekubitalvene und Mess Protein-Expression von Markern für oxidativen Stress mittels Immunfluoreszenz beurteilt werden. Wir bieten hier eine Diskussion dieser Methoden zur Bekämpfung der MKS BA, aPWV und vaskuläre Endothelzellen Protein-Expression zu messen.
Chronische Nierenerkrankungen (CKD) ist eine große öffentliche Gesundheit betreffen, die epidemische Ausmaße erreicht hat, beeinflussen ~ 11,5% der Bevölkerung allein in den Vereinigten Staaten ein. Das Risiko eines kardiovaskulären Todes oder eines kardiovaskulären Ereignisses bei Patienten mit CKD im Vergleich mit der allgemeinen Bevölkerung 4.2 deutlich erhöht. Obwohl Patienten mit CKD zeigen eine hohe Prävalenz von traditionellen kardiovaskulären Risikofaktoren, das nur erklärt, einen Teil ihrer erhöhten Inzidenz von kardiovaskulären Erkrankungen (CVD) 5. Vaskuläre Dysfunktion ist eine wichtige nicht-traditionellen kardiovaskulären Risikofaktor immer mehr die Anerkennung auf dem Gebiet der Nephrologie 6-9.
Während viele Veränderungen mit der Entwicklung der arteriellen Dysfunktion beitragen, unter denen der größte Sorge sind die Entwicklung des vaskulären endothelialen Dysfunktion, am häufigsten als beeinträchtigt Endothel-abhängige Dilatation (EDD) bewertet und Versteifung des large elastische Arterien 10. Es gibt verschiedene Techniken, um EDD und großen elastischen Arteriensteifigkeit zu bewerten, aber die am häufigsten verwendet werden, sind Oberarmarterie flussvermittelte Dilatation MKS-BA und Aorten-Pulswellengeschwindigkeit (aPWV) sind. Eine andere häufig verwendete Technik, um beurteilen EDD ist die Messung Unterarmblutfluss Reaktion auf pharmakologische Wirkstoffe wie Acetylcholin mit Venenverschlussplethysmographie 11,12. Diese Methode erfordert jedoch Katheterisierung der Arteria brachialis, die mehr invasiv als MKS-BA ist und kann bei Patienten mit CKD kontraindiziert sein. Eine alternative Technik, um arterielle Steifheit zu bewerten ist, um die lokale arterielle Compliance (die Inverse der Steifigkeit) der Halsschlagader zu messen, obwohl dies nicht so weit verbreitet verwendet werden oder mit der klinischen Endpunkte aPWV 13 validiert.
Patienten mit CKD zeigen sowohl eingeschränkter MKS BA 14-16 und erhöhte Aorten-Pulswellengeschwindigkeit aPWV 13,17,18, auch vor der Dialyse benötigen. Wichtig ist aus klinischer Sicht sind diese beiden nicht-invasive Maßnahmen der vaskulären Dysfunktion unabhängige Prädiktoren für zukünftige kardiovaskuläre Ereignisse und Mortalität sowohl bei Patienten mit CKD 19-21, sowie in anderen Populationen 22-26. Diese Techniken lassen sich Studium verschiedener Populationen in Gefahr, CVD, einschließlich Patienten mit CKD angewendet werden.
Die genauen Mechanismen, durch die arterielle Dysfunktion entwickelt sich in CKD sind unvollständig verstanden; jedoch reduziert Stickstoffmonoxid (NO) Bioverfügbarkeit eine kritische Faktor 27-30 und ein gemeinsamer Mechanismus sowohl beeinträchtigt EDD und erhöhten arteriellen Steifigkeit 10,31. In CKD wird oxidativen Stress erhöht und trägt zur Reduzierung der NO-Bioverfügbarkeit 32-34. Oxidativer Stress gilt als mäßiger Bioverfügbarkeit von reaktiven Sauerstoffspezies (ROS), bezogen auf die antioxidative Schutz definiert. Physiologische Stimuli, inc.Luding entzündlichen Signalisierung fördern Oxidationsenzymsysteme ROS zu produzieren, einschließlich Superoxid-Anion (O 2 ● -) (z. B. die Oxidationsmittel-Enzym NADPH-Oxidase.) 35. Produktion von Superoxid führt schließlich zur Bioverfügbarkeit von Stickstoffmonoxid (NO) reduziert.
Beeinträchtigte NO Bioverfügbarkeit kann wiederum dazu beitragen, die Entwicklung der CKD, wie endotheliale Dysfunktion ist ein unabhängiger Prädiktor des einfallenden CKD 36. Dies steht im Einklang mit Tier-Daten, die auf eNOS-Hemmung induziert Hypertonie (systemischen und glomerulären), glomeruläre Ischämie, Glomerulosklerose und Tubulointerstitielle 37 Verletzungen. Tatsächlich reduziert NO Bioverfügbarkeit notwendig erscheint für die Entwicklung und Progression von experimenteller Nierenerkrankung, die menschliche Krankheit imitiert, was auf eine wichtige Rolle für die endotheliale Dysfunktion in der menschlichen CKD 38,39.
Marker der vaskulären oxidativen Stress in v beurteilenascular Endothelzellen aus menschlichen Versuchspersonen gesammelt, unter Verwendung einer Technik, die ursprünglich von Colombo et al. 40 entwickelt und modifiziert Dichtungen et al 41-43. Mit 2 sterile J-Leitungen werden die Zellen aus der Antekubitalvene gesammelt, zurückgewonnen, fixiert und später positiv als Endothelzellen identifiziert und für die Expression von Proteinen von Interesse unter Verwendung von Immunfluoreszenz analysiert.
Wir bieten hier eine Diskussion dieser Methodik, die zu einer) Maßnahme MKS-BA verwendet werden kann; b) messen aPWV; c) messen vaskulären endothelialen Zellprotein Expression von Markern für oxidativen Stress. Der Schwerpunkt liegt auf Patienten mit CKD, chronischer Dialyse erfordert.
Beziehen präzise Ergebnisse für die MKS-BA und aPWV erfordert den Erwerb qualitativ hochwertige Ultraschallbilder und Druckwellenformen auf. Zentral ist dabei angemessene und kontinuierliche Schulung und Nutzung der einzelnen Verfahren durch den Bediener 44. Darüber hinaus ist es wichtig, so viele externe Variablen, die die Ergebnisse wie möglich durch die Standardisierung der Testsitzung (z. B. vor 12 Stunden fasten, klimatisierten Raum, etc.) 44,45 beeinflussen st…
The authors have nothing to disclose.
Die Autoren danken Nina Bispham für ihre technische Unterstützung. Diese Arbeit wurde von der American Heart Association (12POST11920023) und den NIH (K23DK088833, K23DK087859) unterstützt.
Name of Material/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
J-wire | St. Jude | 404584 | 2 per collection |
Disposable shorts (MediShorts) | Quick Medical | 4507 | |
Non-invasive hemodynamic workstation (NIHem) | Cardiovascualr Engineering | N/A | Includes custom ruler. An alternate system is the Sphygmocor |
Ultrasound | G.E. | Model: Vivid7 Dimension | We use a G.E., but there are many companies and models |
Vascular software (Vascular Imager) | Medical Imaging Applications | N/A | |
R-wave trigger box | Medical Imaging Applications | N/A | custom made |
Rapid Cuff Inflation System | Hokanson | Model: Hokanson E20 | |
Forearm blood pressure cuff | Hokanson | N/A | custom cuff with 6.5 x 34 cm bladder |
HUVECs | Invitrogren | C-015-5C | |
Donkey serum | Jackson | 017-000-121 | |
Pap pen | Research Products International | 195505 | |
VE Cadherin | Abcam | ab33168 | |
AF568 | Life Technologies | A11011 | depends on specifications of microscpe |
AF488 | Life Technologies | A11034 | depends on specifications of microscpe |
Nitrotyrosine antibody | Abcam | ab7048 | |
NADPH oxidase antibody | Upstate | 07-001 | |
DAPI | Vector | H-1200 | |
Delicate task wipe (Kimwipe) | Fisher Scientific | 06-666-A | |
Plastic paraffin film (parafilm) | Fisher Scientific | 13-374-10 | |
Confocal microscope | Olympus | Model: FV1000 FCS/RICS | many options exist |