Análise de marcha automatizados em ratos com lesão crônica de constrição
Summary
A avaliação precisa da resposta de dor em um modelo animal neuropática é crítica para investigar a fisiopatologia das doenças dor e desenvolver novos analgésicos. Apresentamos um método sensível e objetivo para determinar a função sensorial do roedor hind pata por um sistema de análise de marcha automática.
Abstract
O teste de von Frey é um método clássico que tem sido amplamente utilizado para examinar a função sensorial dos animais de dor neuropática. No entanto, tem algumas desvantagens, tais como dados subjetivos e a exigência de um experimentador hábil, experiente. Até à data, uma variedade de modificações melhoraram o método de von Frey, mas ainda tem algumas limitações. Relatórios recentes têm sugerido que a análise da marcha produz dados mais precisos e objectivos dos animais neuropáticas. Este protocolo demonstra como realizar a análise de marcha automática para determinar o grau de dor neuropática em ratos. Após vários dias de aclimatação, os ratos foram autorizados a andar livremente sobre o piso de vidro para iluminar as pegadas. Em seguida, quantificação das pegadas e da marcha foram realizadas através de clips de vídeo com análise automática de vários parâmetros ambulante, como área de pata tempo impressão, balanço, ângulo da pata, etc.
O principal objetivo deste estudo é descrever a metodologia de análise de marcha automática e brevemente compará-lo com os dados do teste sensorial clássico usando filamentos de von Frey.
Introduction
As alterações patológicas do sistema nervoso induzidos por trauma, disfunção metabólica, inflamação, infecção, isquemia, ou doença auto-imune, ocasionalmente, resultar em dor neuropática, que é definida como uma dor que surjam como consequência directa de uma lesão ou doença afetando o sistema somatossensorial1. A dor neuropática é geralmente insuportável e infelizmente, analgésicos convencionais geralmente não produzem suficiente alívio de dor2. Das principais características da dor neuropática contém espontâneas e evocado por estimulação dores (i.e., alodinia e hiperalgesia). Alodinia é uma resposta nociceptiva que ocorre a estímulos normalmente não-dolorosos, tais como o leve toque ou estimulação quente. Hiperalgesia indica uma resposta melhorada dor aos estímulos mecânicos ou térmicos nocivos3. Embora estes dois sintomas criticamente prejudicam qualidade de vida o paciente é, mecânica alodinia evocada pela estimulação tátil suave é o sintoma mais agravante porque contato macio é difícil evitar na vida cotidiana.
Para investigar o mecanismo subjacente e novos analgésicos para o tratamento da dor neuropática, a medição precisa da resposta dor é essencial. Desenvolveram-se numerosos modelos animais de dor neuropática nociceptivos respostas o Hind pata área por causa de sua alta acessibilidade4,5,6,7. Assim, a maioria das avaliações de resposta de dor foram realizadas na superfície dorsal ou plantar da pata traseira através da aplicação de estímulos mecânicos, utilizando instrumentos especiais, como filamentos de von Frey. Dentre o método mais frequentemente utilizado é a acima e para baixo método descrito por Dixon8 e mais tarde modificado versões9,10. No entanto, muito capacitados, experientes experimentadores são necessários para executar o teste de von Frey e os resultados podem ser subjetivos.
O sistema de análise de marcha automatizado pode investigar distúrbios neuromusculares e neurológicos medindo-se vários parâmetros de andar em roedores movimentando-se livremente. Em uma variedade de modelos animais de lesão de nervo, o grau de nocicepção e o efeito antinociceptiva de vários tratamentos que podem ser avaliadas sem adicionar uma dor estimulação11,12,13, 14. este sistema de análise pode detectar parâmetros de marcha estático e dinâmico, tais como: pata a área de impressão (a área da pata completa impressão que entra em contato com o chão), pata de intensidade (a intensidade média da área de contato pata), comprimento (do passo postura de distância entre sucessivas colocações da mesma pata), fase (a duração do contato do solo de uma única pata traseira), a sequência de etapas (a ordem na qual as quatro patas são colocados no chão), balanço (a duração da fase de balanço) e velocidade (calculada do balanço do comprimento do passo e duração do balanço e expressa em pixels por segundo). Este documento demonstra o uso de um sistema de análise e fornece uma breve comparação dos dados com o teste de von Frey usando ratos neuropática de constrição crônica lesão (CCI).
Protocol
Representative Results
Discussion
Atualmente, a medição de alodinia mecânica por meio de filamentos de von Frey é o mais amplamente utilizado método em modelos animais de dor para demonstrar a hipersensibilidade tátil. Como modelos animais de dor neuropática continuaram a ser desenvolvidos, a metodologia de avaliação de função sensorial tem sido também melhorou8,9,10,15. Esses relatórios, tem sido sugerido que essa…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Esta pesquisa foi apoiada pelo Chungnam University, Coreia Instituto Nacional de Medicina Oriental (KIOM) e uma subvenção da Coreia saúde tecnologia R & D o projeto através da Coreia saúde indústria desenvolvimento Institute (KHIDI), financiado pelo Ministério da saúde & Bem-estar, República da Coreia (número de concessão: HI15C0007).
Materials
| 0.9% Saline | JW Pharmaceutical | N/A | Vehicle for drugs |
| 1ml syringe | BD Plastipak | 300013 | Injecting device |
| 2, 2, 2-tribromoethanol (97% purity) | Sigma | T48402 | Anesthetic |
| 2-methyl-2-buthanol (99% purity) | Sigma | 152463 | Solvent for 2, 2, 2-tribromoethanol |
| Catwalk Automated gait analysis system | Noldus | N/A | Automatic analysis software of aniaml gait |
| Chromic catgut (4-0 thickness) | AILEE | C442 | Ligature to make chronic constriction injury on the sciatic nerve |
| Gabapentin | Sigma | Y0001280 | Analgeisc, Used as a positive control drug in this study |
| Graefe Forceps | F.S.T | 11051-10 | Surgical instrument |
| Heating Pad | DAESHIN ELECTRONICS | M-303AT | Regulation of body temperature |
| ICR Mouse | Samtaco | N/A | Experimental animal |
| Mersilk (3-0 thickness) | ETHICON | W598H | Suture material for surgical closure of skin |
| Micro-Mosquito | F.S.T | 13010-12 | Surgical instrument |
| Micro-scissors | F.S.T | 14090-09 | Surgical instrument |
| Needle holder | F.S.T | 12002-12 | Surgical instrument |
| Povidone Iodine | Firson | N/A | Disinfectant to prevent infection after surgery |
| Scalpel blade | F.S.T | 10010-00 (#10) | Surgical instrument to make an incision |
| Scalpel handle | F.S.T | 10003-12 (#3) | Surgical instrument to make an incision |
| Von-Frey filaments | North Coast | NC12775-99 | Measurement device to test sensory function for mechanical stimulation |
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