Biz mRNA ifade biyolojik kapaklarini türetilmiş hücre (PDC) vitamin C (C vitamini) ve 1,25-dihidroksi vitamin D [1,25-(OH)2D3] tarafından indüklenen araştırmak için bir protokol mevcut. Buna ek olarak, PDC osteocytes, kondrosit ve adiposit ayırt etmek yeteneği değerlendirmek.
Mezenkimal Kök hücre (MSCs) çeşitli dokularda ve dokusunu da dahil olmak üzere çok sayıda hücre tipe ayrılır. MSCs diş kaynaklar arasında kapaklarini MSCs cambium katmanında içerecek şekilde belirlenmiştir kolayca erişilebilir bir doku olduğunu. Ancak, bu kaynak henüz yaygın olarak araştırılmamıştır.
D vitamini3 ve 1,25-(OH)2D3 MSCs vitro farklılaşma dokusunu içine uyarmak için gösterdi. Buna ek olarak, C vitamini kollajen oluşumu ve kemik hücre büyümesini kolaylaştırır. Ancak, hiçbir çalışma henüz MSCs D vitamini3 ve C vitamini etkilerini araştırmış.
Burada, insan alveoler kapaklarini MSCs izole bir yöntem mevcut ve 1,25-(OH)2D3 bu hücrelerde bir osteoindüktif etki gösterirler hipotez inceleyin. Ayrıca insan alveoler kapaklarini MSCs varlığında araştırmak ve kök hücre adezyon ve nükleer silahların yayılmasına karşı değerlendirmek. (Kontrol) olarak C vitamini yeteneği ve 1,25-(OH)2D3 (10−10, 10−9, 10−8ve 10−7 M) anahtar mRNA biyolojik olarak değiştirmek için çeşitli konsantrasyonları değerlendirmek için alkalen fosfataz (ALP), izole MSCs mRNA ifade kemik sialoprotein (BSP), çekirdek bağlama faktör Alfa-1 (CBFA1), kollajen-1 ve osteokalsin (OCN) ölçülen gerçek zamanlı Polimeraz zincir reaksiyonu (RT-PCR) kullanarak.
Her ne kadar son yıllarda çok sayıda ilgili teknikleri geliştirilmiştir, birden fazla kısıtlamaları tarafından sınırlı ve gerekli imar ölçüde kez mümkün değildir tahmin imar kalır kemik. Sert doku büyütme olumlu bir uzun vadeli başarı oranı yanı sıra estetik ve fonksiyonel hedeflere ulaşmak için gereklidir. Tür yordamlar için yaygın olarak kullanılan yöntemleri otojen ve allojenik Kemik greftleme, ksenografi ve alloplastic Kemik greftleme içerir. Kemik grefti çeşitli türleri arasında otojen kemik grefti en etkili olarak kabul edilir. Ancak, donör sitesi morbidite, güvenliği aşılan vascularity ve sınırlı doku kullanılabilirlik1 otojen Kemik greftleme için büyük dezavantaj olmuştur. Buna ek olarak, allojenik kemik grefti ve xenografts hastalık iletim ile ilişkili bulunmuştur. Şu anda, sentetik kemik grefti yaygın olarak bu sorunları gidermek için kullanılır. Ancak, Osteojenik potansiyelini onların eksikliği ile klinik sonuçlar yaygın olarak çeşitli var. Selüloz gibi malzemeler birim dalgalanma, enfeksiyon ve gücü eksikliği ile ilişkili olan.
Doku Mühendisliği kullanarak kemik büyütme büyük ilgi üretti. Bu teknikte Mezenkimal Kök hücre (MSCs) başlangıçta osteoblast farklılaşma, tanıtmak için hangi o zaman kemik kaybı kemik onarım elde etmek için siteye nakledilen kullanılır. Bu yordamı şu anda hücre tedavisi uygulanır. Kemik rekonstrüksiyonu doku sınırlı bir miktarda çıkartarak elde diğer yöntemlere göre daha basit ve daha az invazif var.
MSCs potansiyel rolü hücre tabanlı terapiler diş yenilenme amaçlı için bir araç olarak çeşitli araştırma grupları arasında ortaya çıkan bir ilgi vardır. Çalışmalar MSCs doku aşağıdaki türlerden farklılaşmış doğruladı: kemik iliği, yağ, sinovyal membran, pericyte, Trabeküler kemik, insan göbek kordonu ve diş dokuları2,3. Kemik iliği, yağ dokusu ve diş dokuları MSCs ortak kaynakları içerir. Yağ doku ve kemik iliği elde MSCs ile karşılaştırıldığında, diş kök hücrelerin kolay erişilebilirlik ve daha az morbidite hasat sonrası avantajları. Embriyonik kök hücreleri ile karşılaştırıldığında, diş dokusundan elde edilen MSCs nonimmunogenic görünür ve karmaşık etik kaygılar3ile ilişkili değildir.
2006’da, uluslararası toplum hücresel tedavi için MSCs belirlemek için aşağıdaki standartları kullanan önerilen: ilk olarak, MSCs plastik için ekleme yeteneğine sahip olması gerekir. İkinci olarak, MSCs CD105, CD73 ve CD90 yüzey antijenleri için pozitif ve negatif işaretçileri monositler, makrofajlar ve B hücreleri hematopoetik antijenleri CD45 ve CD344yanı sıra için olması gerekir. Son bir ölçüt olarak MSCs hücreleri vitro farklılaştırma standart koşullar altında aşağıdaki üç tür içine ayırt etmek gerekir: dokusunu, adipositler ve kondrosit4. Bugüne kadar altı tür insan diş kök hücre izole karakterize ve. Birinci tip insan hamuru dokusundan izole edildi ve postnatal diş pulp kök hücre5olarak adlandırdığı. Daha sonra diş MSCs üç ek tür izole ve karakterize: kök hücrelerden pullu yaprak döken dişler6, periodontal ligament7ve apikal papilla8. Daha yakın zamanlarda, diş kökü elde edilen9, dişeti doku kaynaklı10, diş bud kök cells(DBSCs)11ve periapical kist MSCs (hPCy-MSCs)12 de tespit edilmiştir.
Friedenstein MSCs13tanımlamak için ilk oldu. Hangi onlar rejeneratif yordamlar10için ideal aday olduğunu göstermektedir MSCs yüksek proliferasyon potansiyel sergi ve nakledilen önce ayırt etmek için kullanılabilirler.
Her ne kadar çoğu çalışmalar kemik iliği kök hücre kaynağı olarak kullanmış, kapaklarini kaynaklı hücreler (PDC) de son zamanlarda14kullandık. Kapaklarini kemik iliği olduğundan daha kolay erişilebilir. Bu nedenle, Bu teknikte, biz alveoler kapaklarini ameliyat sırasında ek kesiler ihtiyacını ortadan kaldırmak için ve segmanlar morbidite hastaların azaltmak için kullanın. Kapaklarini formları uzun kemiklerin dış astar ve iki ayrı katmanlar oluşur bağ dokusu olduğunu: fibroblastlar, kollajen ve Elastik lifler15ve iç hücre zengini cambium katman doğrudan temas dış fibröz tabaka oluşur kemik yüzeyi ile. Cambium katman içeren karma hücre nüfus, öncelikle fibroblastlar16, dokusunu17, perisitlerden18ve MSCs19,20,21tanımlanan kritik bir subpopulation. Çoğu çalışmalar PDC’ler karşılaştırılabilir değilse üstün, kemik iliği elde edilen kök hücre (bMSCs) kemik iyileşmesi ve rejenerasyon22,23,24bildirdi. Kapaklarini kolayca ulaşılabilir ve mükemmel rejeneratif etkinliğini sergiler. Ancak, birkaç çalışmalar kapaklarini25,26,27tarihinde odaklanmıştır.
Kemik onarımı ile ilgili destekleyici iskele içinde güçlendirilmiş periosteal progenitör hücre nakli mevcut klinik uygulama içerir. Son yıllarda yapılan çalışmalarda arızalı bölgeleri kök hücre alınıyor ve progenitör hücre doku rejenerasyonu20istihdam odaklı olması. Diş hekimleri de periodontal kemik rejenerasyon periodontal tedavi ve Diş implantları yönelik uygulama tahmin. Donör sitesi ile ilgili kapaklarini kolayca genel diş cerrahları tarafından hasat edilebilir. Kapaklarini-ebilmek var olmak giriş sırasında rutin ağız cerrahisi gibi bu olumlu iliği stromal hücreler karşı karşılaştırır. Böylece, bu çalışmanın amacı PDC’ler hasat için bir protokol oluşturmak için ve Morfoloji, ek, canlılık ve insan kapaklarini kök hücrelerin çoğalması değerlendirmek için olduğunu.
D vitamini metabolitleri vivo içinde kemik mineral Dinamik denge etkiler. Bir çalışmada 24R,25-(OH)2D3 etkin form d vitamini insan MSCs (hMSCs)28osteoblastik farklılaşması için gerekli olduğunu bildirdi. Kemik homeostazı ve onarım D vitamini3 metabolitleri, hangi 1,25-(OH)2D3 (kalsitriol) en biyolojik olarak aktif ve tür Kemik sağlığı ile ilgili olan bir şebeke tarafından düzenlenmektedir. D vitamini3 kalsifikasyon29için esastır. 2-d-yaşlı Kunming beyaz fare kullanarak bir çalışma içinde C vitamini ve D vitamini takviyeleri etkili ESC kaynaklı dokusunu30farklılaşma terfi embryoid cesetleri farelerde belirtti. Diğer biyolojik faaliyetleri arasında 1,25-(OH)2D3 hMSCs için izlenebilir alkalen fosfataz (ALP) enzim aktivitesi veya OCN gen artış temel dokusunu, vitro farklılaşma uyarır. ifade.
Kaç çalışmalar insan PDC’ler kemik doku Mühendisliği özel bir odaklanma ile2D3 C vitamini ve 1,25-(OH) ile kombine tedaviler bir doz-yanıt ilişkisi tespit etti. Bu nedenle, bu çalışmada, 1,25-(OH)2D3 tek veya kombine tedavi için en uygun konsantrasyonlarda ve C vitamini insan PDC’ler Osteojenik farklılaşma inducing için inceleyin. Bu protokol diş alveoler kapaklarini izole bir hücre nüfus hücreleri bir MSC fenotip ve olup bu hücreler kültür (vitro) genişletilmiş olabilir ve istenilen doku oluşturmak için ayrıştırılan içerip içermediğini belirlemek için hedeftir . Buna ek olarak, PDC osteocytes, kondrosit ve adiposit ayırt etmek yeteneği değerlendirmek. Çalışmanın ikinci bölümünde C vitamini ve 10−10, 10−9, 10−8ve 10−7 M 1,25-(OH)2D3 PDC’ler Osteojenik aktivite üzerine etkileri değerlendirir. Bu çalışmanın temel amacı PDC’ler osteoblastik farklılaşma ALP etkinlik ve ALP gibi pro Osteojenik genler tarafından sırasında C vitamini ve 1,25-(OH)2D3 fonksiyonları değerlendirmek etmektir kollajen-1, OCN, BSP ve CBFA1. Buna ek olarak, bu çalışmada bu bulgularına dayanarak insan PDC için en uygun osteoindüktif koşulları belirler.
Son zamanlarda gelişmiş bir tedavi yöntemidir, yani doku MSCs, gerektiren mühendislik sayısız avantajı vardır. MSCs, çeşitli doku tipleri içinde var olmayan, fonksiyonel Mezodermal doku hücreleri37 çeşitli içine ayırabilirsiniz multipotent hücreleri ve dokusunu gibi diğer hücreleri vardır.
Bir niş progenitör hücrelerin kapaklarini görür ve kemik için zengin damarlara kaynağı olarak38zarf. 34 incelenen örnekleri, bizim…
The authors have nothing to disclose.
Çalışma Protokolü klinik araştırma, Chang Gung Memorial Hastanesi için (IRB99-1828B, 100-3019 C, 99-3814B, 102-1619 C, 101-4728B ve 103-4223 C) kurumsal inceleme Kurulu tarafından onaylanmıştır. Bu çalışmada Chang Gung Memorial Hastanesi (CMRPG392071, CMRPG3A1141, CMRPG3A1142 ve NMRPG3C0151) tarafından desteklenmiştir. Bu el yazması Wallace akademik düzenleyerek düzenlendi.
0.25% trypsin-EDTA | Gibco | 25200-056 | |
2-phospho-L-ascorbic acidtrisodium salt | Sigma | 49752 | |
35-mm culture dishes | Corning | 430165 | |
3-isobutyl-1-methylxanthine | Sigma | I5879 | |
6 well plate | Corning | 3516 | |
Alkaline phosphatase | ABI | Hs01029144_m1 | |
Alkaline Phosphatase Activity Colorimetric Assay Kit | BioVision | K412-500 | |
avian myeloblastosis virus reverse transcriptase | Roche | 10109118001 | |
CD146 | BD | 561013 | |
CD19 | BD | 560994 | |
CD34 | BD | 560942 | |
CD44 | BD | 561858 | |
CD45 | BD | 561088 | |
CD73 | BD | 561014 | |
CD90 | BD | 561974 | |
Cell banker1 | ZEAOAQ | 11888 | |
core binding factor alpha-1 | ABI | Hs00231692_m1 | |
dexamethasone | Sigma | D4902 | |
DPBS | Gibco | 14190250 | |
FBS | Gibco | 26140-079 | |
GAPDH | ABI | Hs99999905_m1 | |
HLA-DR | BD | 562008 | |
indomethacin | Sigma | I7378 | |
insulin | sigma | 91077C | |
insulin–transferrin–selenium-A | Sigma | I1884 | |
MicroAmp Fast 96 well reaction plate(0.1ml) | Life | 4346907 | |
MicroAmp optical adhesive film | Life | 4311971 | |
Minimum Essential Medium 1X Alpha Modification | HyClone | SH30265.02 | |
Penicillin/Streptomycin | Gibco | 15140-122 | |
Permeabilization buffer | eBioscience | 00-8333-56 | |
Sodium pyruvate | Gibco | 11360070 | |
STRO-1 | BioLegend | 340103 | |
SYBER Green PCR Master Mix | AppliedBiosystems | 4309155 | |
TaqMan Master Mix | Life | 4304437 | |
transforming growth factor-β | Sigma | T7039 | |
Trizol reagent (for RNA isolation) | Life | 15596018 | |
β-glycerophosphate | Sigma | G9422 | |
collagen-1 | Invitrogen | forward primer 5' CCTCAAGGGCTCCAACGAG-3 | |
reverse primer 5'-TCAATCACTGTCTTGCCCCA-3' | |||
OCN | Invitrogen | forward primer 5'-GTGCAGCCTTTGTGTCCAAG-3' | |
reverse primer 5'-GTCAGCCAACTCGTCACAGT-3' | |||
BSP | Invitrogen | forward primer 5' AAAGTGAGAACGGGGAACCT-3' | |
reverse primer 5'-GATGCAAAGCCAGAATGGAT-3' | |||
Commercial ALP primers | |||
Commercial CBFA1 primers |