Die Pflanze-Infektion-Test: Spray und Wunde-vermittelten Inokulation mit Pflanzen Pathogen Magnaporthe Grisea
Summary
Hier präsentieren wir ein Protokoll zur Pflanze Virulenz mit dem Werk Erreger testen Magnaporthe Grisea. Dieser Bericht wird dazu beitragen, das große Screening von Pathotypen von Pilzen Isolaten und dienen als ein ausgezeichneter Ausgangspunkt für das Verständnis der resistenten Mechanismen der Pflanzen während der molekularen Züchtung.
Abstract
Pflanzen besitzen ein leistungsstarkes System zur Selbstverteidigung gegen potenzielle Bedrohungen durch pathogene Pilze. Für landwirtschaftlich wichtigen Pflanzen jedoch aktuelle Maßnahmen gegen solche Erreger zu konservativ erwiesen und somit nicht ausreichend wirksam, und sie können möglicherweise aufwerfen Umweltrisiken. Daher ist es äußerst notwendig, um Host-Resistenzfaktoren bei controlling Pflanzenkrankheiten natürlich durch die Identifizierung von resistenten Keimplasma, die Isolierung und Charakterisierung von Genen und der molekularen Züchtung identifizieren der resistenten Sorten. In dieser Hinsicht gibt es brauchen, um eine präzise, schnelle und großflächige Impfung Methode zum Züchten und entwickeln Pflanze-Resistenz-Gene zu etablieren. Der Reis pilzliche Erreger Magnaporthe Grisea Ursachen schwere Krankheitssymptome zu sprengen und Verluste ergeben. Vor kurzem, hat M. Grisea als Modellorganismus zur Erforschung der Mechanismen der Pflanze-Pilz Pathogen Interaktionen entstanden. Daher berichten wir über die Entwicklung einer Pflanze Virulenz Testmethode, die spezifisch für M. Grisea. Diese Methode bietet für Spray Inokulation mit conidial Federung und verletzte Inokulation mit Myzel Würfel oder Wassertropfen conidial Aufhängung. Der entscheidende Schritt der Verwundung Inokulation Methode für freistehende Reis Blätter soll Wunden auf Pflanzenblättern, die vermeidet Störungen verursacht durch Host eindringwiderstand. Dieses Spray/Verwundung Protokoll trägt zur schnellen, genauen und groß angelegte Vorführung des Pathotypen M. Grisea -Isolate. Diese integrierte und systematische Anlage Infektion Methode wird als ein ausgezeichneter Ausgangspunkt für die Gewinnung einer breiten Perspektive Fragen in Pflanzenpathologie dienen.
Introduction
Reis-Explosion, verursacht durch M. Grisea, ist eine der schwersten Krankheiten für Reis Sorten weltweit,1,2. Der Prozess, durch den M. Grisea Wirtspflanzen infiziert, umfasst eine Konidien Produktion und Oberfläche Anlage, eine Konidien Keimung und Appressorium Bildung, eine Formation von penetrationspflocks und infektiöse Ascokarpen Differenzierung und Ausbreitung einer Krankheit 3. alle diese Stadien sind häufig in viele andere Pflanze pathogene Pilze, und in der Tat eine Blockade von jeder einzelnen Phase verhindert die Infektion von Wirtspflanzen. Aufgrund seiner wirtschaftlichen Bedeutung und genetische Lenkbarkeit entstanden M. Grisea als Modellorganismus zur Erforschung der Mechanismen der Pflanze-Pilz Pathogen Interaktionen1,4. Daher wird studieren die Molekulare Grundlagen der diese Entwicklungsstadien in M. Grisea zur Aufklärung der molekularen Mechanismen Pilz Pathogenität und die Identifizierung von Kandidaten Zielgene für Screening und Gestaltung Roman Fungizide-5.
Jüngste Berichte über M. Grisea Infektion konzentrierten sich auf die molekularen Mechanismen der Pre Eindringen Stufen, vor allem die Conidiation, die Appressorium Bildung Eindringen Stöpsel und ansteckende Wachstum3, 6. Daher ist es wichtig, ein detailliertes Protokoll um zu testen, M. Grisea Infektion zu entwickeln. Hier präsentieren wir Ihnen eine detaillierte Methode für eine Infektion-Test, der Spray-vermittelte Infektion Assays mit einer conidial Federung und die Impfung von Wunden mit Myzel Stecker M. Griseanutzt. In diesem Bericht konzentriert sich das Protokoll auf die Kultur der Stämme, die Vorbereitung der Conidiation Lösung zum aufsprühen und das Myzel Stecker-vermittelten Inokulation von Pflanzen mit M. Grisea. Diese Schritte werden im folgenden ausführlich und eine schematische Darstellung zeigt den gesamten Workflow von der Methode beschrieben und eine typische Läsion sind in den Abbildungen 1 und 2, bzw. gezeigt.
Protocol
Representative Results
Discussion
Pflanze-Krankheit-Resistenz-Gene spielen eine wesentliche Rolle bei der Verhinderung von Infektionen durch Krankheitserreger, einschließlich pilzerreger1,12. Reis-Explosion wurde als Modell zu verstehen, die Art des Erregers Bevölkerungsstrukturen und Werk Widerstand Gene4identifizieren eingesetzt. Daher ist es notwendig zu prüfen, die Krankheit Widerstand Genotyp und avirulenz Genotypen der wichtigsten Sorten der landwirtschaftlichen P…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Diese Arbeit wurde durch das spezielle wissenschaftliche Forschungsprojekt Universität Peking Landwirtschaft (YQ201603) und das wissenschaftliche Projekt der Peking-Studienkommission (KM201610020005) unterstützt.
Materials
| Agar | AOBOX Biotechnology（China） | 01-023 | |
| Filter paper | GE Healthcare brand(Sweden) | 10311387 | |
| 50-mL tube | CORNING(Amercia) | 430290 | |
| Centrifuge | Eppendorf(Amercia) | 5804R | |
| Tween-20 | Coolaber（China） | CT11551-100ml | |
| Culture dish | Thermofisher(Amercia) | 150326 | |
| 0.5-5 mL pipette | Eppendorf | 4920000105 | |
| 100-1000uL pipette | Eppendorf | 4920000083 | |
| Vacuum pump | Leybold | D25B | |
| Dissection needle | FST | 26000-35 | |
| Incubator | MEMMERT | PYX313 | |
| Inoculation ring | Greiner Bio One | 731175 |
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