我们描述了一个瘦的 pcos 样小鼠模型的发展与 dihydrotestosterone 丸研究 pcos 的病理生理学和这些 pcos 样水坝的后代。
需要JoVE订阅才能观看此内容。 请登录或开始免费试用
本文内容
摘要
摘要
Hyperandrogenemia 在女性生殖和代谢功能中起着至关重要的作用, 是多囊卵巢综合征的标志。开发一种瘦的 pcos 样小鼠模型, 模仿妇女与 PCOS 是临床意义。在本协议中, 我们描述了这样一个模型。通过插入4毫米的氢睾酮 (dihydrotestosterone) 晶体粉末颗粒 (总长度的颗粒是8毫米), 并在每月更换, 我们能够产生一个 PCOS 样的小鼠模型与血清氢睾酮水平2倍高于未植入 dht (无氢睾酮) 的小鼠。我们观察到生殖和代谢功能障碍, 而不改变体重和身体组成。在表现出高度不孕症的同时, 这些 PCOS 样雌性小鼠的一小部分可以怀孕, 他们的后代显示延迟青春期和增加睾酮作为成人。这种 pcos 样瘦老鼠模型是一个有用的工具, 研究 pcos 的病理生理学和这些 pcos 样水坝的后代。
引言
Hyperandrogenism 是多囊卵巢综合征 (PCOS) 的标志, 根据 NIH 标准和雄激素过剩和 pcos (AE pcos) 社会。患有 PCOS 的妇女很难怀孕, 并增加了妊娠并发症的风险1。即使他们怀孕了, 他们的雌性后代也会有不良的健康结局2,3。动物模型已经开发使用各种策略4,5,6,7,8,9,10,11,12并表现出多囊卵巢综合征 (停止排卵、葡萄糖和胰岛素耐受) 的特点, 体重增加和肥胖与脂肪细胞体积增大和脂肪细胞重量增加有关。生产用于研究 PCOS 的动物模型有两种主要的策略。一是治疗与高水平的雄激素直接 (外源性雄激素注射/插入) 或间接 ....
访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。
方案
在这里, 我们提出了氢睾酮颗粒的准备和插入, 以及生殖和新陈代谢测试的详细协议。在这项研究中使用的老鼠是一个混合的背景 (C57/B6, CD1, 129Sv), 并保持与食品和水广告随意在14/10 小时/暗循环24°c 在百老汇研究建筑动物设施在约翰霍普金斯大学学校医学。所有程序均经约翰霍普金斯大学动物保育和使用委员会批准。
1. 创建类似 PCOS 的小鼠模型
-
氢睾酮颗粒制剂
- 高压釜硅橡胶油管消毒。用剃刀刀片将硅橡胶管切割至长度为15毫米的管子;
- 将医用粘合剂硅胶注射到管中, 用20克钝针附着在3毫升注射器上, 密封一侧。应从注射器中取出柱塞, 然后将粘合剂插入储层中。柱塞被重新插入, 粘合剂推下, 直到它开始出现从针。钝针是用任何强力剪刀切割20克针尖侧。管中硅的长度应超过2毫米, 以允许生产后修整;
- 夜间干燥;检查密封一侧的气泡。没有气泡的人被用来做氢睾酮丸。其他可用于无氢睾酮控制丸。
- 戴上手套, 面具, 护目镜和实验室大衣, 然后在罩里做氢睾酮颗粒, 以避免双氢睾酮暴露在皮肤上。
- 将双氢睾酮粉倒入塑料称重船中, 并按在 A1.1 上的胶封管的开口侧 (在中产) 加入 dht 粉末。
- 双氢睾酮粉可以用一个大的回形针来夯实。 继续, 直到双氢睾酮达到4毫米 (或期望长....
访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。
结果
血清双氢睾酮水平与葡萄糖耐受试验
用 ELISA 法和 LC-MS 根据1.24–1.25 和2.9、3.0 测定血清中的双氢睾酮水平。双氢睾酮的绝对值在质谱和 ELISA 上是不同的, 但是, dht 的相对折叠 (大约2倍) 与无氢睾酮的插入是相似的从测试和横跨实验15,23,24 (图 2A<.......
访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。
讨论
Hyperandrogenism 是 PCOS 的一个重要特征。本协议所用的血清氢睾酮水平 (dht 小鼠的两倍以上) 比以前的研究中其他研究者报告的要低, 并且被校准成比例模拟的妇女与 PCOS5,19, 20,21。与其他模型不同的是, 这种2倍的 dht 模型不会改变体重和全身成分, 与无氢睾酮的小鼠相比, 3.5 月后, dht 插入23
访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。
致谢
这项工作得到了国家卫生研究院 (赠款 R00-HD068130 白雪) 和巴尔的摩糖尿病研究中心的支持: 飞行员和可行性赠款 (白雪)。
....访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。
材料
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 结晶 5α-DHT 粉末 | Sigma-Aldrich | A8380-1G | |
| 道康宁硅橡胶管 | Fisher Scientific | 11-189-15D | 0.04 英寸/1 毫米内径 x0.085 英寸/2.15 毫米外径 |
| 医用胶粘剂硅胶 | 因子 II，InC。 | A-100 | |
| 护目镜、实验室外套、手套和口罩。 | |||
| 10 µ不带过滤器的 L 移液器吸头 | USA Scientific | 11113700 | |
| 用于涂片的显微镜载玻片 | Fisher Scientific | 12-550-003 | |
| 用于细胞染色的 Diff Quik 用于细胞染色 | Fisher Scientific | NC9979740 | |
| 柳叶刀 | Fisher Scientific | NC9416572 | |
| 3 mL Syring | Becton， Dickinson and Company （BD）， | 30985 | |
| 附针：20 G | BD | 305176 | |
| 尺：任何长度小于 10 厘米，毫米刻度。 | |||
| 甲苯噻嗪 | Vet one AnnSeA LA， MWI， Boise | NDC13985-704-10 | 100 mg/mL |
| 氯胺酮盐 | Hospira， Inc | NDC 0409-2051-05 | 100 mg/mL |
| 手术钉 | AutoClip®系统，精细科学工具 | 12020-00 | |
| 胰岛素注射器 | BD | 329461 | 1/2 CC，低剂量 U-100 胰岛素注射器 |
| 套管针 | 美国创新研究 | MP-182 | |
| 显微镜 | 卡尔蔡司 Primo Star | 415500-0010-001 | 德国 |
| 打耳 | Fisher Scientific | 13-812-201 | |
| 睾酮大鼠/小鼠 ELISA试剂盒 | IBL | B79174 | |
| DHT ELISA 试剂盒 | Alpha Diagnostic International | 1940 | |
| 一键式超血糖仪 | Life Scan， Inc. | ||
| 一键式超测试条 | Life Scan， Inc. | ||
| Eppendorf 管 | Fisher Scientific | 05-402-18 | |
| 剃须刀片 | Fisher Scientific | 12-640 | |
| Clidox | Fisher Scientific | NC0089321 | |
| 手术垫 | Fisher Scientific | 50587953 | 制造商：Andwin Scientific 56616018 |
| Betadine 消毒液 | Walgreens | ||
| 3M Vetbond（氰基丙烯酸正丁酯） | 3M Science.应用于生活 |
参考文献
- Palomba, S., de Wilde, M. A., Falbo, A., Koster, M. P., La Sala, G. B., Fauser, B. C. Pregnancy complications in women with polycystic ovary syndrome. Hum. Reprod. Update. 21 (5), 575-592 (2015).
- Doherty, D. A., Newnham, J. P., Bower, C., Hart, R.
访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。
重印与许可
