Name: Murine 신장 이식 절차 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-07-10T00:00:00.000+00:00
Duration: 18 min 48 s
Description: 배우세요 생쥐 신장 이식 수술 절차와 이식 후 관리 방법을. 이식 거부 반응 연구 및 신장 기능 평가를 위한 동물 모델로 활용할 수 있습니다.

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이러한 연구 GAH에 NIH R01 AI36532에 의해 기금에 의해 부분적으로 지원되었다. 우리는 박사 Tibor Nadasdy에서 제공하는 이식 병리학의 뛰어난 지원을 인정하고,이 연구 노력을 시작으로 후반 박사 찰스 G. Orosz에서 제공하는 귀중한지도 데다가 것입니다.

기증자 장기 적출 수술 (2) : <ol><li> 65mg/kg pentobarbital IP를 사용하여 기증자를 마취, 마취는 Isoflurane (2-3 %)에 의해 유지됩니다. </li><li> 기증자 복부를 입력하고 오른쪽 옆으로 소장 이동하여 왼쪽 신장을 폭로 가슴에서 치골에 정중선 절개를합니다. </li><li> 8-0 실크 봉합사와 부신과 고환 혈관 ligating과 나누어 왼쪽 신장을 분리. </li><li> 신장 동맥과 정맥과의 접합 위의 대동맥을 준비 시켜라. </li><li> 신장 동맥과 정맥과의 접합부 위 아래 하부 대정 맥 (IVC)을 동원. </li><li> 출혈을 최소화하기 위해 8-0 실크 봉합사와 신장 동맥과 정맥 아래의 대동맥을 Ligate. </li><li> 신장 hilum에서 방광 왼쪽 ureter을 해부하다. </li><li> 방광 돔에서 caudad 철회를 사용하여 ureterovesical 접합을 폭로. </li><li> 방광 - 투 - 방광 요도 문합를 통해 재건에 사용되는 왼쪽 ureterovesical 접합을 포함하는 방광의 엑사이스 작은 타원형의 패치. 오른쪽 ureter은 방광에 포함되어 있지 않습니다. </li><li> 8-0 실크 봉합사와 신장 동맥과 정맥 아래 IVC를 Ligate. </li><li> 신장 동맥과 정맥 위의 대동맥을 Ligate, 천천히 0.2 - 0.4ml 감기로 현장에서 그래프트를 perfuse, infrarenal 대동맥을 통해 링어의 락트 솔루션 heparinized. </li><li> 8-0 실크 봉합사와 신장 동맥과 정맥 위의 IVC를 Ligate. </li><li> IVC와의 교차점에서 신장 정맥을 가로로 쪼개다. </li><li> 신장 동맥 아래 약 2mm, obliquely 대동맥을 나눕니다. </li><li> 신장과 연방 EN 방광 패치에 연결된 ureter와의 혈관 공급을 제거합니다. 얼음 링어의 락트 산 용액에 보관하십시오. </li><li> 마취하에 자궁 경부 전위에 의해 기증 마우스를 안락사. </li></ol> 받는 사람 이식 (2) : <ol><li> 65 MG / kg pentobarbital IP를받는 사람을 마취와 Isoflurane으로 마취 (2-3 %)를 유지합니다. </li><li> , 정중선 절개를 확인 서부 유럽 표준시 거즈로 소장을 커버하고 조심스럽게 왼쪽으로 철회. </li><li> 오른쪽 ureter, 신장 동맥과 정맥을 Ligate, 오른쪽 신장을 제거합니다. </li><li> 조심스럽게 허리 지점을 ligating 이후 두 4 - mm microvasular 클램프와 infrarenal 대동맥과 IVC을 분리하고 교차 클램프. </li><li> 대동맥의 전체 두께 10-0 나일론 봉합사를 놓고 한 컷 (선박의 직경의 5 분의 1 정도)하여 타원형 aortaotomy를 만들기 위해 철회. </li><li> 30 게이지 바늘로 IVC를 관통하고 적절하게 microscissors를 사용하여 확장하여 길이 venotomy하십시오. </li><li> intraluminal 혈액이나 혈전을 취소 heparinized 호수와 대동맥과 IVC 모두 관개. </li><li> 얼음에서 기증자의 신장을 제거하고 마우스의 오른쪽 측면에 내부 abdominally 그것을 놓으십시오. 기증자 신장은 차가운 호수 - 절어 거즈 패드와 함께 촉촉한 보관됩니다. </li><li> 기증자의 대동맥을 재는 완과받는 사람의 aortaotomy의 근위 및 말초 꼭대기에 두 개 숙박 봉합합니다. </li><li> 대동맥의 외부에 2 ~ 3 연속 10-0 나일론 봉합을 사용하여 기증 대동맥 수갑을 채워받는 aortaotomy의 앞쪽에 벽을 사이의 엔드 - 투 - 사이드 문합를 확인합니다. </li><li> 받는 사람의 좌측으로 기증자 신장 이식을 돌립니다. 기증자 대동맥 수갑을 채워받는 aortaotomy의 후부 벽 사이의 이전 절차를 반복 </li><li> IVC의 내부에 4-5 지속 10-0 나일론 봉합을 사용하여 기증자 신장 정맥과받는 사람 IVC의 후부 벽 사이의 엔드 - 투 - 사이드 문합을 수행합니다. 그리고 IVC 및 기증자 신장 정맥의 앞쪽에 벽은 IVC 외부 4 ~ 5 연속 봉합과 함께 폐쇄됩니다. </li><li> 정맥과 동맥 모두의 문합 20 분 이내에 완료해야합니다. </li><li> 문합 동안 차가운 식염수로 여러 번 그래프트를 씻어. </li><li> 받는 사람 방광의 돔을 분할하고, 소작과 함께 출혈이 중지합니다. </li><li> 돔에 작은 절개를합니다. </li><li> 받는 사람의 방광 돔와 기증자 작은 방광 패치를 anastomize에 10-0 나일론의 두 숙박 봉합를 놓습니다. 문합의 각 측면은 8 ~ 10 연속 봉합사와 봉합합니다. </li><li> 연속 4-0 무균, 합성 흡수성 봉합사 vicryl 두 레이어의 복부를 닫습니다. </li><li> 간헐 주입 IV에 의해 수술 도중에받는 생쥐에게 0.4ml 따뜻한 호수주세요. </li></ol> 수신자의 포스트 수술 케어 <ol><li> 복부를 닫은 후, 페니실린 (500U/10g)의 하나 근육내 주사는 (2) 관리합니다. </li><li> 또한, 수신자가 고통을 하루 종일 0 1 일 게시 수술에 intramuscularly 0.05 밀리그램 / kg buprenorphine를 받게됩니다. 실험 테 때까지 수술 후, 이식 수신자 sulfatrim (100mg/kg)를 포함하는 물을받을 수rminated. </li><li> 첫 24 시간에 대한 postoperatively 생쥐는 배양기를 제어 온도에 보관하고 있습니다. </li><li> 마우스는 일반적으로 작업을 1 시간 이내에 마취에서 회복하고 정기적으로 음식과 물 광고 libitum 부여됩니다. </li><li> 피부 봉합 2 주 수술 후 제거됩니다. </li></ol> 수신자 신 <ol><li> 65 MG / kg pentobarbital IP를받는 4 ~ 7 일 포스트 신장 이식 마취, 마취는 Isoflurane (2-3 %)에 의해 유지됩니다. </li><li> 정중선 절개를 통해 복부를 엽니다. </li><li> 생리 - 젖었 거즈로 소장을 커버하고 신중하게 오른쪽으로 철회. </li><li> 왼쪽 ureter, 신장 정맥과 동맥을 ligating 후 왼쪽 신장을 제거합니다. </li><li> 연속 4-0 합성 흡수성 봉합사 vicryl 두 레이어의 복부를 닫습니다. </li></ol> 전체 혈액 크레아티닌 측정 <ol><li> 미만 0.2 CC의 격주 혈액 컬렉션 주간은 Isoflurane 마취 마취 또는 역 orbitally없이도 submandibularly 수행됩니다. </li><li> 양적 전체 혈액 크레아티닌 수치는 I - 합계 휴대용 임상 분석기 (Heska 공단, 포트 콜린스, CO)를 사용하여 결정됩니다. </li><li> 종래의 단위 (MG / DL)은 88.4로 종래의 단위를 곱하여 micromol / L의 SI 단위로 변환됩니다. </li></ol>

<ol><li>Russell, P. S., Chase, C. M., Colvin, R. B., Plate, J. M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kidney+transplants+in+mice.+An+analysis+of+the+immune+status+of+mice+bearing+long-term%2C+H-2+incompatible+transplants%5BTitle%5D)+AND+%22JExpMed%22%5BJournal%5D)">Kidney transplants in mice. An analysis of the immune status of mice bearing long-term, H-2 incompatible transplants.</a> JExpMed. 147, 1449-1468 (1978).</li>
<li>Zhang, Z., Schlachta, C., Duff, J., Stiller, C., Grant, D., Zhong, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+techniques+for+kidney+transplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Improved techniques for kidney transplantation in mice.</a> Microsurgery. 16 (2), 103-109 (1995).</li>
</ol>

동물 실험은 오하이오 주립 대학 IACUC에 의해 명시된 지침과 규정에 따라 수행되었다.

우리는&gt; 90 % 기술 성공률과 마우스에서 신장 이식의 약 1천2백가지 경우을 수행했습니다. 심장 이식에 비해 신장 이식의 성공률은 일반적으로 낮다. 그러나, 저희 연구실은 신장 이식의 높은 성공률을 (&gt; 90%) 유지하고 있습니다. 성공을위한 핵심 포인트는 기증자의 신장과받는 사람 모두에게 reperfusion의 부상을 감소하고, 절차 및 사후 operatively 전역 출혈 및 혈전증을 최소화하는 것입니다. 다음과 같은 요인이 가장 중요한 수 있습니다 : (A) 수술하는 동안받는 사람의 피를 최대한 신중하고 부드러운 동작을 통해를 줄이고, (B) 기증 신장 준비와 수신자 이식하는 동안 따뜻한 허혈성 및 교차 클램핑 시간을 최소화하고, (C) 괴사, 불충 분한 혈액 공급 및 방광 유출 수술을 방지하기 위해 작은 기증자 방광 패치를 사용하여, 원래 신장의 (D) 지연 신 사까지 ~ 칠일 후 이식 이식 신장 수술 다음과 같은 기능을 복구할 수 있도록, (E ) 혈전증의 발생을 줄이기 위해 대동맥 밖 anastomose...

<table><tbody><tr><td>i-STAT</td><td>기타</td><td>HESKA</td><td>Cat 5101</td><td></td></tr><tr><td>i-STAT 카트리지</td><td>기타</td><td>HESKA</td><td>CAT 5110-CREA</td><td></td></tr><tr><td>Sulfatrim</td><td>기타</td><td>Actavis</td><td>R02109</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>기타</td><td>NOVAPLUS</td><td>CA-0474</td><td></td></tr><tr><td>10-0 봉합사</td><td>수술</td><td>Sharpoint</td><td>AK0100</td><td></td></tr></tbody></table>

murine 신장 이식 절차

Murine Renal Transplantation Procedure

생쥐의 신장 이식 orthotopic은 기술적으로 도전적인 절차입니다. 생쥐에서 처음으로 신장 이식이 (1) 벌써 30 년 동안 러셀 외 수행하고 년후 장 외 (2)에 의해 정제했지만, 세계에서 몇 사람이 프로 시저를 마스터했습니다. 저희 연구실에서는 성공적으로&gt; 90 % 생존율과 1200 orthotopic 신장 transplantations을 수행했습니다. 성공을위한 핵심 포인트는 두 절차 및 사후 이식하는 동안 reperfusion 상해, 출혈 및 혈전증의 엄격한 통제를 포함하고, anastomoses 대신 11-0 봉합사의 10-0 중 하나를 사용하십시오. 받는 사람의 포스트 수술 관리 및 치료 성공과 평가를 이식하기 위해 매우 중요합니다. 모든 신장 이식의 수신자는 즉시 페니실린의 주사 지속적으로 마시는 물 속에 포스트 이식과 sulfatrim의 형태로 항생제를받을 수 있습니다. 전체 동물의 건강은 매일 전체 혈액 크레아티닌 분석이 이식편 기능을 평가하기위한 휴대용 I - STAT 기계와 함께 정기적으로 수행 평가됩니다.

생쥐의 신장 이식은 성공을위한주의 이후 수술 진료와 치료를 필요로하는 기술적으로 도전적인 절차입니다.

Murine 신장 이식 절차

마우스의 신장 정위 이식은 기술적으로 매우 까다로운 시술입니다. 마우스에서의 첫 신장 이식은 Russell에 의해 수행되었으며...

마우스 신장 이식 절차는 공여 마우스에서 왼쪽 신장을 적출하여 얼음에 보관하는 공여 장기 적출로 시작됩니다. 수혜 마우스에서는 공여 신장을 이식할 공간을 확보하기 위해 오른쪽 신장을 제거합니다. 그 후 공여 신장을 얼음에서 꺼내 수혜 마우스에 이식합니다.남아 있는 자생 신장을 제거하기 전, 마우스가 4일 동안 회복하도록 합니다. 7일 후, 이식편 기능을 평가하기 위해 I STAT 휴대용 임상 분석기를 사용하여 크레아티닌 수치를 모니터링합니다. 안녕하세요, 저는 오하이오 주립대학교 이식외과 및 Greg Hadley 박사 연구실의 Sarah Heimer입니다.오늘은 마우스의 신장 이식 절차를 보여드리겠습니다. 오늘 보실 신장 이식 수술은 상주 전문가인 신경외과 의사 Jing Wing이 수행합니다. 저희 실험실의 이 절차를 통해 이식 거부 반응의 면역학적 사건과 거부 반응 발생을 방지하기 위한 전략을 연구하시기 바랍니다.그럼 시작하겠습니다. 공여 장기 적출을 시작하기 위해, 동물이 완전히 마취되었는지 확인하기 위해 발가락 집기(toe pinch)를 수행합니다. 멸균 구역 내에서 멸균된 기구를 사용하여, 마취된 마우스의 흉골부터 치골까지 정중선 절개를 실시하고, 공여 신장 관류를 위해 장을 오른쪽으로 측면 이동시켜 왼쪽 신장을 노출시킵니다. 신동맥과 신정맥의 상하단에 있는 대동맥과 하대정맥 주위를 4-0 실크 봉합사로 결찰합니다.신장 하대정맥으로 차가운 헤파린 처리된 링거 젖산 용액을 이용하여 서서히 체내 관류합니다. 8-0 실크 봉합사로 부신 및 정소 혈관과 몇몇 요추 분지를 결찰하고 절단하여 왼쪽 신장을 분리합니다. 다음으로, 대동맥과 하대정맥이 왼쪽 신동맥 및 신정맥과 만나는 부위를 가동화하고, 신동맥과 신정맥의 위아래 대동맥 및 하대정맥 주위에 4-0 실크 봉합사로 결찰합니다.출혈을 최소화하기 위해, 먼저 신혈관 아래쪽의 대동맥을 결찰하십시오. 그 다음, 신문에서 방광까지 왼쪽 요관을 박리하여 분리하십시오. 방광 돔(bladder dome)에 코다 리트랙션(coda retraction)을 사용하여 요관-방광 접합부를 노출시키십시오.우측 요관이 손상되지 않도록 주의하며, 좌측 요관의 방광 접합부가 포함된 방광의 작은 타원형 조각을 절제합니다. 이 조직 조각은 방광-방광 문합술을 통한 비뇨기 재건에 사용됩니다. 그 다음, 신동맥과 신정맥 상단에서 대동맥을 결찰합니다.신장 하대동맥을 통해 차가운 헤파린 처리 링거 젖

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

특정 세포로 hESCs의 감독 차별은 재생 의학에 많은 관심을 생성했다. 우리는 결정을위한 간결하고 단계별 절차를...

기형 종의 형성에 의해 인간 배아 줄기 세포의 운명 매핑

절연 아일 레츠의 이식은 제 1 형 당뇨병에 대한 잠재적인 치료로 제안되었습니다. 여기 마우스 pancreata에서 아일 레츠를 분리하고 신장의 subcapsular 공간을 이식하는 방법을 설명합니다.

Murine 아일릿 절연 및 Subcapsular 신장 이식을위한 방법

여기에서는 거부 반응의 면역학을 연구하기 위한 프로토콜을 제시합니다. 제시된 수술 모델은 짧은 수술 시간과 간결한 기술을 보여주었습니다. 기증자-수용자 균주 조합에 따라 이식된 신장은 간질성 섬유증 및 세뇨관 위축으로 정의되는 급성 세포 거부 반응 또는 만성 동종이식 손상이 발생할 수 있습니다.

마우스 신장 이식 : 동종 이식 거부의 모델

이 보고서는 면역 결핍 마우스 수혜자의 신장 캡슐 아래에 다른 노화 기증자 마우스의 쥐 흉선을 이식하는 방법에 대한 자세한 설명을 제공합니다. 이 접근법의 목표는 생체 내에서 T 세포 발달 및 흉선 선택 이벤트를 모델링하는 것입니다.

분리 및 다른 세 쥐 흉선 이식의 이식.

이 원고의 목표는 동맥 문합에 대한 세부 사항에 특히 주의를 기울여 마우스에서 신장 이식을 수행하는 데 필요한 단계를 설명하는 것입니다.

쥐 신장 이식 기술

우리는 2'-데옥시구아노신 처리 된 E18.5 흉선을 누드 마우스의 신장 캡슐로 이식하는 간단하고 효율적인 방법을 제공합니다. 이 방법은 흉선 상피 세포 기능과 T 세포 성숙 의 연구에서 보좌관해야한다.

누드 마우스에서 2'-Deoxyguanosine 처리 된 뮤린 배아 흉골의 신장 탈모 이식

이 프로토콜은 변형 된 동맥 해부학 전략에 초점을 맞춘 마우스 신장 이식의 새로운 수술 기술을 제시합니다. 간단하고 안전한 요관-방광 해부학 방법을 포함하는 혈관 봉합 기술도 제시된다. 이러한 변형은 수술 시간을 단축시키고 마우스 신장 이식 절차의 성공률을 향상시킵니다.

마우스의 신장 이식을위한 수정 된 수술 기술

쥐 동위원소 신장 이식 모델은 신장 동종이식편 거부의 메카니즘을 조사하는 데 기여한다. 현재의 모델은 신장 이식의 종단 간 해부학과 요관 방광 문합술의 종단 간 "터널"방법을 사용하여 혈액 공급 및 정맥 역류에 간섭하지 않고 수혜자의 생존을 증가시킵니다.

신장 동종이식편 거부반응을 위한 쥐 동위원소 신장 이식 모델

이 프로토콜은 안전하고 잘 내약되는 쥐 양측 신림프절반 절제술의 생존 절차를 설명합니다.

마우스 양측 신림프절출술

마우스 heterotopic 심장 이식 모델은 거부하고 면역 반응의 메커니즘을 연구를위한 중요한 방법으로 많은 수사관에 의해 입증되었습니다. 그러나, 관련 기술은 여전히​​ 도전하고 있습니다. 표준 기술을 수정하여 우리는 1000 개 이상의 이식 성공을 있었다.

마우스의 Heterotopic 심장 이식

배우세요 생쥐 신장 이식 수술 절차와 이식 후 관리 방법을. 이식 거부 반응 연구 및 신장 기능 평가를 위한 동물 모델로 활용할 수 있습니다.

Murine 신장 이식 절차

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