诱导大鼠慢性实验性自身免疫性干眼症的技术

取一只先前用含有泪腺来源的自身抗原和外来抗原的抗原佐剂乳剂免疫的大鼠。

重新注射乳剂并腹腔注射百日咳毒素，确保最大程度的 T 细胞活化。

活化的细胞分化为循环效应记忆T细胞，TEM和组织驻留记忆T细胞，TRM。一定比例的 TRM 存在于眼表组织中。

规定的时间间隔后，将抗原注射到穹窿结膜下和泪腺中，诱导局部炎症。

结膜下抗原呈递细胞 （APC） 向 TRM 呈递抗原，触发细胞因子释放。

细胞因子诱导结膜上皮细胞释放趋化因子，从而招募 TEM。

APC 重新激活浸润的 TEM，触发促炎细胞因子释放。

细胞因子导致产生粘蛋白的结膜杯状细胞死亡，降低粘蛋白水平，并导致泪膜不稳定。

细胞因子诱导泪腺细胞死亡——减少泪液的产生——并刺激角膜上皮细胞产生基质金属蛋白酶，从而损害角膜。

评估大鼠的临床特征，以表明成功诱导干眼症。

在第零天，将含有 1 毫克泪腺提取物和 200 微克卵清蛋白的 200 微升乳液分配，并将弗氏佐剂完全放入 1 毫升鲁尔锁注射器中，并在注射器中配备 27 号针头。

在不使用麻醉的情况下，在大鼠尾巴的底部皮下注射乳液。然后，在第 14 天以类似的方式注射 200 微升相同的抗原和不完整的弗氏佐剂。同一天，腹腔注射300纳克百日咳毒素，溶于100微升PBS。

在第48天，称取所需量的卵清蛋白并将其溶解在PBS中，然后，将卵清蛋白与本视频前面制备的解冻泪腺提取物混合，制成含有每毫升卵清蛋白1毫克和每毫升泪腺提取物1毫克的抗原溶液。

大鼠后，将5微升抗原注射到眼睛的穹窿下结膜中，然后，将20微升抗原注射到泪腺中。