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Identificação de cinesina-1 Cargas Utilizando microscopia de fluorescência
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生物学
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JoVE 杂志 生物学
Identification of Kinesin-1 Cargos Using Fluorescence Microscopy

Identificação de cinesina-1 Cargas Utilizando microscopia de fluorescência

DOI:
10.3791/53632-v

•

08:06 min

•

February 14, 2016

•

1Department of Oncological Sciences,Icahn School of Medicine at Mount Sinai

Chapters

  • 00:05Title
  • 00:39Cell Culture for Immunofluorescence Microscopy
  • 01:32Preparation of Transfection Complex and Transfection of Cells
  • 03:08Live Cell Imaging and Indirect Immunofluorescence
  • 05:40Results: Identifying Kinesin Cargo via Fluorescence Microscopy
  • 06:50Conclusion

Summary

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Aqui, um protocolo é apresentada para identificar cinesina-1 cargas. Um mutante motorless da cinesina-1 de cadeia pesada (KIF5B) agrega no citoplasma e induz a agregação de suas cargas. Ambos os agregados são detectados por microscopia de fluorescência. Uma estratégia semelhante pode ser empregue para identificar cargas de outras proteínas do motor.

Tags

Kinesin-1CargosFluorescence MicroscopyMolecular MotorsDominant Negative KIF5B MutantsLive Cell ImagingIndirect Fluorescence ImagingImmunofluorescent StudiesCover GlassesCell CultureTransfection MediumTdTomato-tagged Wild Type KIF5B Expression PlasmidMotorless KIF5B Expression PlasmidCandidate Cargo Protein

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