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ハイスループットシーケンシングを利用し全体プロテイン飽和突然変異誘発ライブラリの機能評価のためのプロトコル
JoVE 杂志
生物学
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JoVE 杂志 生物学
A Protocol for Functional Assessment of Whole-Protein Saturation Mutagenesis Libraries Utilizing High-Throughput Sequencing
DOI:

11:36 min

July 03, 2016

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Chapters

  • 00:05Title
  • 00:43Synthesis of NNS Sub-libraries for Each Amino Acid Position by Two-step PCR Site-directed Mutagenesis
  • 01:53Cloning of NNS Sub-libraries into Selection Vectors
  • 03:47Selection of the TEM-1 Whole-Protein Saturation Mutagenesis Library for Antibiotic Resistance
  • 05:51High Throughput Sequencing to Determine Fitness Effects of Mutations
  • 08:44Results: High Throughput Sequencing from Whole-Protein Saturation Mutagenesis
  • 10:16Conclusion

Summary

自动翻译

我々は、ハイスループットシーケンシングを利用したタンパク質の包括的な単一部位飽和突然変異誘発ライブラリの機能評価のためのプロトコルを提示します。重要なことに、このアプローチは、ライブラリー構築および配列決定を多重化するために直交するプライマー対を使用しています。アンピシリンの臨床的に関連する用量で選択されたTEM-1βラクタマーゼを使用して、代表的な結果を提供しています。

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