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ニューロンの細胞密売研究のためのチューブ内の組換えBDNFを精製し、直接モノビオチン化するための改良されたプロトコル
JoVE 杂志
神经科学
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JoVE 杂志 神经科学
An Improved Protocol to Purify and Directly Mono-Biotinylate Recombinant BDNF in a Tube for Cellular Trafficking Studies in Neurons
DOI:

13:46 min

July 11, 2020

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Chapters

  • 00:00Introdcution
  • 00:48Transfection of HEK293 cells
  • 01:49Media Collection and Storage
  • 03:02Media Concentration and Purification
  • 04:58In vitro Mono-biotinylation Reaction
  • 06:01Biotinylation Analysis
  • 06:56Visualization of Retrograde Axonal Transport of BDNF-QD in Live Neurons
  • 07:58Represetative Results
  • 13:17Conclusion

Summary

自动翻译

Avi配列を含む組換えBDNF(BDNFAvi)は、コスト効率の高い方法でHEK293細胞で産生され、アフィニティークロマトグラフィーによって精製される。BDNFaviは、その後、チューブ内の酵素BirAで直接モノビオチン化されます。BDNFaviおよびモノビオチン化BDNFaviは、市販のBDNFと比較して生物学的活性を保持します。

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