Journal
/
神经科学
/
Улучшенный протокол для очищения и непосредственно моно-биотинилат рекомбинантный BDNF в трубе для клеточного исследования торговли в нейронах
JoVE 杂志
神经科学
Author Produced
需要订阅 JoVE 才能查看此.  登录或开始免费试用。
JoVE 杂志 神经科学
An Improved Protocol to Purify and Directly Mono-Biotinylate Recombinant BDNF in a Tube for Cellular Trafficking Studies in Neurons
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.

Улучшенный протокол для очищения и непосредственно моно-биотинилат рекомбинантный BDNF в трубе для клеточного исследования торговли в нейронах

DOI:
10.3791/61262-v

•

13:46 min

•

July 11, 2020

•

, , , ,
1Department of Physiology, Faculty of Biological Sciences,Pontificia Universidad Católica de Chile, 2Department of Molecular and Cellular Biology, Faculty of Biological Sciences, Center for Aging and Regeneration (CARE UC),Pontificia Universidad Católica de Chile, 3Institute of Biomedical Sciences. Faculty of Medicine and Faculty of Life Sciences,Universidad Andrés Bello, 4Department of Neuromuscular Diseases, UCL Queen Square Institute of Neurology and UK Dementia Research Institute at UCL,University College London Campus

Chapters

  • 00:00Introdcution
  • 00:48Transfection of HEK293 cells
  • 01:49Media Collection and Storage
  • 03:02Media Concentration and Purification
  • 04:58In vitro Mono-biotinylation Reaction
  • 06:01Biotinylation Analysis
  • 06:56Visualization of Retrograde Axonal Transport of BDNF-QD in Live Neurons
  • 07:58Represetative Results
  • 13:17Conclusion

Summary

自动翻译

自动翻译

Рекомбинантный BDNF, содержащий последовательность Ави (BDNFAvi), производится в клетках HEK293 экономически эффективным образом и очищается с помощью хроматографии сродства. BDNFavi после этого сразу mono-biotinylated с энзимом BirA в пробке. BDNFavi и моно-биотинилированные BDNFavi сохраняют свою биологическую активность по сравнению с коммерчески доступным BDNF.

Tags

Keywords: BDNFRecombinantPurificationMono-biotinylationCellular TraffickingHEK293 CellsTransfectionChromatographyFluorescence MicroscopyOptimizationPolyethylenimineSodium ChlorideImidazoleProtease InhibitorsBSACentrifugation

Article

Embed

添加到播放列表

Usage Statistics

Related Videos

check_url/cn/61262?article_type=v

Ретроградная Флуоресцентная маркировка Позволяет Целевые Внеклеточные единичные Запись с Выявленные Нейроны<em> В естественных условиях</em
check_url/cn/61262?article_type=v

Запись и анализ циркадных ритмов в рабочем колеса деятельность в Грызуны
check_url/cn/61262?article_type=v

Генетических манипуляций мозжечка Granule нейронов<em> Экстракорпоральное</em> И<em> В Vivo</em> По изучению нейронных Морфология и миграция
check_url/cn/61262?article_type=v

Мозг Slice Биотинилирование:<em> Экс Vivo</em> Подход к Измерьте Регион-специфический плазменным мембранный белок с торговлей взрослых нейронов
check_url/cn/61262?article_type=v

Охвате Анализ: Протокол для оценки взаимодействия между ЦНС фагоцитов и нейронов
check_url/cn/61262?article_type=v

В режиме реального времени изображений аксонов транспорта квантовой точке меченных BDNF в первичных нейронах
check_url/cn/61262?article_type=v

Протокол трехмерной конфокальной морфометрического анализа астроцитов
check_url/cn/61262?article_type=v

Метод к цели и изолят Airway-иннервирующих сенсорные нейроны у мышей
check_url/cn/61262?article_type=v

Моделирования нейронов смерти и дегенерации в мышь первичной мозжечковой гранул нейронов
check_url/cn/61262?article_type=v

Изображения в реальном времени GLUT4 белка оборота первичной нейронов гипоталамуса мыши с помощью микроскопии деконволюция

Read Article