Traditionnellement, la tranche verticale et de toute la préparation de montage de la rétine ont été utilisés pour étudier la fonction des circuits de la rétine. Ici, nous décrivons le roman tranchage méthode pour préserver la morphologie dendritique des neurones rétiniens intacte.
Abstract
Traditionnellement, la tranche verticale et de toute la préparation de montage de la rétine ont été utilisés pour étudier la fonction des circuits de la rétine. Cependant, de nombreux neurones de la rétine, telles que les cellules amacrines, d'élargir leurs dendrites horizontalement, de sorte que la morphologie des cellules est censée être gravement endommagés dans les tranches verticales. Dans toute la préparation de montage, notamment pour les enregistrements de patch-clamp, les neurones rétiniens dans la couche intermédiaire ne sont pas facilement accessibles en raison de l'importante couverture des cellules gliales endfeets s (cellule de Mueller). Ici, nous décrivons le roman tranchage méthode pour préserver la morphologie dendritique des neurones rétiniens intacte. La tranche a été faite à l'horizontale à la couche interne de la rétine à l'aide d'une trancheuse vibratome après la rétine a été intégré dans le bas température de fusion gel d'agarose. Dans cette préparation tranche horizontale de la rétine, nous avons étudié la fonction des neurones de la rétine par rapport à leur morphologie, en utilisant patch-clamp, la technique d'imagerie calcique, immunocytochimie, et une seule cellule de RT-PCR.
Protocol
Préparer un bloc de gélose (30 mg / ml, soit 3%, dans l'eau distillée). Dissoudre et micro-ondes c'est d'abord et versez-la dans un plat en verre. Gardez le plat au réfrigérateur à 4 o C. Astuce: Le bloc de gélose doivent être préparés à l'avance. Préparer à basse température de fusion du gel d'agarose (25 mg / ml, soit 2,5%, en moyenne). Dissoudre et micro-ondes qu'elle. Gardez-le dans le bain d'eau chaude à 35 ° C. Astu…
Discussion
Il ya plusieurs avantages importants de la préparation tranche horizontale de la rétine.
Tout d'abord, la morphologie des cellules qui s'étendent horizontalement dendrites, comme les cellules amacrines et les cellules horizontales, est préservée. Il a été démontré qu'il ya plus de 20 types de cellules amacrines dans la rétine (MacNeil et Masland, 1998), de sorte qu'il est très important de comparer la morphologie des cellules avec la propriété physiologique.
Deuxièmement, dans la rétine toute m…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Nous remercions les Drs. Richard H. Masland et Akimichi Kaneko de nous donner des conseils et des suggestions utiles pour établir la procédure de la préparation de tranches horizontales de la rétine.
Materials
Material Name
Typ
Company
Catalogue Number
Comment
Agar
Sigma
A-1296
Agarose L
Wako
317-01182
Low-temperature melting agarose
Hyaluronidase
Sigma
Type I-S, 300 units/mg
Medium
in mM: 102 NaCl, 3.1 KCl, 2.0 CaCl2, 1.0 MgCl2, 23 NaHCO3, and 10 glucose, maintained at pH 7.8, or, Ames’ Solution (Sigma)