زرع عدسة في اسماك الزرد وتطبيقاتها في تحليل المسوخ العين
Summary
عدسة التنمية تنطوي على تفاعلات مع الأنسجة الأخرى. وتتميز العديد من المسوخ الزرد العين عن طريق عدسة صغيرة الحجم بصورة غير طبيعية. هنا نظهر تجربة زرع عدسة لتحديد ما إذا كان هذا النمط الظاهري هو نتيجة لأسباب ذاتية أو تفاعلات مع الأنسجة التالفة التي تحيط العدسة.
Abstract
عدسة يلعب دورا هاما في تطوير الكأس البصرية [1،2]. باستخدام الزرد باعتباره النموذج الحي ، ويمكن تناول المسائل المتعلقة بالتنمية العدسة. والزرد مفيد للدراسات الجينية نظرا لخصائص مفيدة عدة ، بما في ذلك صغر الحجم ، وخصوبة عالية ، ودورة حياة قصيرة ، وسهولة العناية. عدسة التنمية يحدث بسرعة في الزرد. بنسبة 72 HPF ، العدسة الزرد ناضجة وظيفيا [3]. وفرة الموارد الوراثية والجزيئية المتاحة لدعم البحوث في الزرد. بالإضافة إلى ذلك ، التشابه في العين الزرد لتلك الفقاريات الأخرى يوفر أساسا لاستخدامه نموذجا ممتازا للحيوانات عيوب الإنسان [4-7]. المسوخ الزرد يحمل عدة تشوهات العدسة ، بما في ذلك مستويات عالية من موت الخلايا ، والتي في بعض الحالات يؤدي إلى انحطاط كامل للأنسجة عدسة [8].
لتحديد ما إذا كان الشذوذ العدسة هي نتيجة لأسباب ذاتية أو لخلل التفاعل مع الأنسجة المحيطة بها ، ويتم تنفيذ زرع عدسة داخل العين متحولة من النوع البري. يتم تشريح بعناية الإبر المعدنية باستخدام النار مصقول ، والعدسات متحولة أو البرية نوع من الحيوانات المانحة ، وتحويلها إلى المضيف. لتمييز الأنسجة من النوع البري ومتحولة ، يتم استخدام خط المعدلة وراثيا والجهة المانحة. هذا الخط يعبر عن غشاء محدد GFP في جميع الأنسجة ، بما في ذلك العدسة. زرع هذه التقنية أداة أساسية في دراسات المسوخ عدسة الزرد.
Protocol
Discussion
عدة خطوات تتطلب اهتماما خاصا خلال زرع عدسة.
- شحذ الإبر : إنه من الأفضل أن تعد الإبر عدة قبل تنفيذ زرع العدسة ، وغيض من الإبر ينبغي أن تكون رقيقة قدر الإمكان. وهناك أكثر سمكا إبرة المسيل للدموع الأنسجة بسبب قطرها على نطا?…
Acknowledgements
يتبع هذا الإجراء إلى حد كبير على تقنية زرع المتقدمة للأسماك الكهف من قبل مختبر جيفري بيل.
Materials
| Material Name | Typ | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 0.1mm diameter tungsten wire | A Johnson Matthey | 45086 | ||
| Agarose(low melting point) | Sigma | 39346 | ||
| Borosilicate glass capillaries | World Precision Instruments | TW 100-4 | ||
| Forceps | Dumont #5 | 11252-30 | ||
| Pasteur pipette | Fisher | 13-678-20C | ||
| Pipette pump | Fisher | 13-683C | ||
| Petri Dish | CardinalHealth | D1906 | ||
| Penicillin-streptomycin | GIBCO | 15140-122 |
Referenzen
- Thut, C. J., Rountree, R. B., Hwa, M., Kingsley, D. M. A large-scale in situ screen provides molecular evidence for the induction of eye anterior segment structures by the developing lens. Dev Biol. 231, 63-76 (2001).
- Yamamoto, Y., Jeffery, W. R. Central role for the lens in cave fish eye degeneration. Science. 289, 631-633 (2000).
- Easter, S. S., Nicola, G. N. The development of vision in the zebrafish(Danio rerio). Dev Biol. 180, 646-663 (1996).
- Schmitt, E., Dowling, J. Early eye morphogenesis in the zebrafish. Brachydanio rerio. J.comp. Neuro. 344 (4), 532-542 (1994).
- Malicki, J. Harnessing the power of forward genetics–analysis of neuronal diversity and patterning in the zebrafish retina. Trends Neurosci. 23 (11), 531-541 (2000).
- Malicki, J., Pujic, Z., Thisse, C., Thisse, B., Wei, X. Forward and reverse genetic approaches to the analysis of eye development in zebrafish. Vision Res. 42 (4), 527-533 (2002).
- Avanesov, A., Malicki, J. Approaches to study neurogenesis in the zebrafish retina. Methods Cell Biol. 76, 333-384 (2004).
- Vihtelic, T. S., Hyde, D. R. Zebrafish mutagenesis yields eye morphological mutants with retinal and lens defects. Vision Res. 42, 535-540 (2002).
- Godinho, L., Mumm, J. S., Williams, P. R., Schroeter, E. H., Koerber, A., Park, S. W., Leach, S. D., Wong, R. O. Targeting of amacrine cell neurites to appropriate synaptic laminae in the developing zebrafish retina. Development. Nov 132, 5069-5079 (2005).
