Method Article

Maus Brustepithelzellen Form Mammospheres Während lactogenic Differenzierung

DOI:

10.3791/1265

⸱

October 6th, 2009

 , 
1Department of Pathology, F. Edward Hebert School of Medicine, Uniformed Services University of the Health Sciences, Bethesda, MD

In This Article

Summary

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HC11 lactogenic Differenzierung kann durch die Bildung von Kuppelbauten genannt mammospheres charakterisiert werden. Die Strukturen können durch Phasenkontrast-Mikroskopie aufgezählt werden, um bei der Quantifizierung lactogenic Differenzierung zu unterstützen.

Abstract

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Eine phänotypische Maßnahme häufig verwendet, um den Grad der Differenzierung in lactogenic Maus Brustepithelzellen Zellkulturen zu bestimmen, ist die Bildung von kuppelförmigen Zellstrukturen genannt mammospheres

Protocol

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  1. Die HC11 Zellen wurden bis zur Konfluenz für 6 Tage in RPMI 1640 Medium mit 10% fötalem Kälberserum, 5μg/ml Insulin, 10 mM HEPES, 10ng/ml epidermal growth factor (EGF), um Kompetenz zu etablieren ergänzt gewachsen.
  2. Die Zellen wurden mit PBS gewaschen und gepflegt in Nährmedien ohne EGF für 24 Stunden.
  3. Zur Induktion lactogenic Differenzierung wurden die Zellen bei der Differenzierung Medien, dh RPMI mit Dexamethason (10 -6 M), Insulin (5 ug / ml) und Prolaktin (5 ug / ml) genannt DIP inkubiert.
  4. Bei den angegebenen Zeiten post-DIP Zusätzlich wurden mammospheres fotografiert und aufgelistet durch Phasenkontrast-Mikroskopie mit einer Olympus IX71....

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Discussion

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Um für diese Technik erfolgreich zu sein und von bester Qualität, die Epithelzellen sind bei Konfluenz gehalten werden, bevor die mit lactogenic Hormone induziert. Es kann Situationen geben, wo es zahlreiche mammospheres, die die Quantifizierung erschwert werden. So quantitative Zwecke ist es am besten, die mammospheres zu einem Zeitpunkt fotografieren, wenn die Zahl der mammospheres kann gezählt werden.

Zwar gibt es verschiedene molekulare Marker verwendet werden, um den Grad der Differenzi.......

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Acknowledgements

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Funds from vom Kongress Regie Medical Research Fund gewähren (DAMD17-01 bis 0264) zu ML Cutler und United States Military Cancer Institute zu ML Cutler unterstützte die Arbeit.

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
RPMIInvitrogen21870076
Fötales RinderserumAtlanta BiologicalsS11550
L-GlutaminGIBCO, von Life Technologies25030
PenStrepGIBCO, von Life Technologies15140
HepesQuality Biological, Inc.
EGFSigma-AldrichE9644
InsulinGIBCO, von Life Technologies12585-014
DexamethasonSigma-AldrichD1756
MikroskopOlympus CorporationIX71
DigitalkameraQImagingRetiga 2000RV Fast 1394
118089060

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Blatchford, D. R., Hendry, K. A., Turner, M. D., Burgoyne, R. D., Wilde, C. J. Vectorial secretion by constitutive and regulated secretory pathways in mammary epithelial cells. Epithelial Cell Biol. 4, 8-16 (1995).
  2. Wang, W.

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Mammary Epithelial CellsMammosphere FormationLactogenic DifferentiationHC11 Cell LinePhase Contrast MicroscopyDexamethasone Insulin ProlactinCell Confluence MaintenanceEpidermal Growth Factor RemovalMammosphere EnumerationMammosphere Size Analysis

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