Wiederholte Messungen von Nagetier Atemfunktion und Probenahme von Atemwegs Entzündungszellen sind wünschenswert, aber in der Regel nicht möglich. Hier beschreiben wir eine wiederholbare Methode für oral Intubation Mäuse, wiederholte Messungen der Atemwege Hyperreaktivität und die Entnahme von Atemwegs-inflammatorischen Zellen ermöglicht.
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Methodenartikel
Eine reversible, nicht-invasive Methode für Airway Resistance-Messungen und bronchoalveolären Lavage Sampling in Mäuse
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Airway Hyperreaktivität (AHR) Messungen und Lavage (BAL) Flüssigkeit Probenahme sind unerlässlich, um experimentelle Asthma-Modellen, sondern wiederholte Verfahren auf diese Messungen in der gleichen Tier zu erhalten sind in der Regel nicht möglich. Hier zeigen wir, Protokolle für die Gewinnung von Mäusen wiederholten Messungen von AHR und Bronchalveolarlavages flüssigen Proben. Die Mäuse wurden intranasal sieben Mal mehr als 14 Tage in Frage gestellt mit einem potenten Allergen oder Schein behandelt. Vor der ersten Herausforderung, und innerhalb von 24 Stunden nach jeder intranasalen Challenge wurden die gleichen Tiere narkotisiert, intubiert und mündlich mechanisch belüftet. AHR, durch den Vergleich Dosis-Wirkungs-Kurven der Atemwege Widerstand (RRS) durch Erhöhung intravenösen Dosen von Acetylcholin (Ach)-Chlorid zwischen Schein und Allergen-induzierte herausgefordert Tiere beurteilt, bestimmt. Danach, und über die gleiche Intubation wurde die linke Lunge gespült, so dass Differential Aufzählung der Atemwege Zellen durchgeführt werden konnte. Diese Studien zeigen, dass wiederholte Messungen der AHR und BAL-Flüssigkeit Abholmöglichkeit sind aus dem gleichen Tiere und die maximale Atemwegshyperreaktivität und Atemwege Eosinophilie sind innerhalb von 7-10 Tagen nach Beginn Allergen-Provokation erreicht. Diese neue Technik reduziert die Anzahl der Mäuse für die Längs-Experimente benötigt und ist für diverse Nagetierarten, Krankheitsmodelle und Atemwege Physiologie Instrumente.
Protokoll
Allergen Herausforderung:
- C57BL / 6 Mäuse, 4-8 Wochen alt, werden in einem luftdichten Plexiglas Kammer mit einer 3,2% Isofluran in Sauerstoff Dampf-Gemisch für 10 Minuten auf tiefe allgemeine Betäubung zu erreichen gespült betäubt.
- Intranasale Allergen Herausforderungen (45μL OVA (22,5 ug) und 7μL A. oryzae (7 ug), in PBS) verabreicht werden, jeden Dienstag, Donnerstag und Sonntag, für eine Gesamtmenge von sieben aufeinander folgenden Anwendungen.
Anästhesie:
- Vor jedem Allergen-Provokation und nach dem 7. Herausforderung, sind Mäuse eine intraperitoneale Injektion von 48 mg / kg Etomidat (2....
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Diskussion
Die Studie von Asthma und verschiedenen anderen Atemwegs-obstruktiven, stellt eine aktive und wachsende Gebiet der biomedizinischen Forschung. Ein wichtiger Bestandteil der Asthma-experimentelle Forschung ist die Fähigkeit, Veränderungen der Atemwege Größe unter verschiedenen Bedingungen zu messen. Übermäßige Verengung der Atemwege in Reaktion auf provokative Herausforderung, eine kanonische Funktion von Asthma und Lungenerkrankungen und eine Eigenschaft der Atemwege bezeichnet Atemwegshyperreaktivität, ist ein wichtige.......
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Danksagungen
Wir danken Herrn Dr. W. Mintzer für den Vorschlag, Fiberoptik orotracheale Intubation durchzuführen. Unterstützt von Zuschüssen U19AI070973, R01AI057696, K02HL75243 und R01HL082487 von den National Institutes of Health.
....Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Materialien
Airway Physiologie Messsoftware (Rescomp) wurde speziell vorbereitet (Millennium Premier Group; 415-519-4371).
Daten wurden unter Verwendung eines PC-Arbeitsplatzes unter Windows XP mit einem Pentium III-Prozessor (Intel, Inc. Santa Clara, CA) und einem 17-poligen analogen zum digitalen Signal-Konverter (National Instruments, # PC-LPM16) ausgestattet.
Ein kleines Tier Atemwege Physiologie Workstation wurde speziell zusammengestellt (Millennium Premier-Gruppe) mit kommerziell erhältlichen Drucksensoren (Teil # TRD5700 und TRD4510), Vorverstärker-Module (Teil # MAX2270), Fahrwerk (Teil # MAX1320, alle aus Buxco, Inc. Wilmington, NC ) und ein maßgeschneidertes kleines Tier Plethysmographen.
0,5 mm Außendurchmesser Glasfaser-Gewinde, verbunden mit der Lichtquelle (Cole Palmer Illuminator, 41722-Serie)
Ventilator (Harvard Apparatus Maus Ventilator, # 687)
10 mm, 27ga Nadel (BD Biosciences, cat. Nr. 309602)
Wärmelampe
1 ml Spritze (BD Biosciences, cat. Nr. 305109)
4 Klammern (Pony 3200 Federklammer)
0,5 mm externen Draht zur Intubation Guide
Hämazytometer
Superfrost / plus Objektträger (Fisher Katze. Nr. 12-550-15)
Shandon Filter Cards (Thermo Katze. Nr. 5991022)
Differential Zelle schieben Fleck (Fisher Katze. Nr. 122911)
Lichtmikroskop (Leica)
Cytospin 3 (Shandon)
20 GA, 1,25 Zoll PROTECTIV intravenösen Kathetern (Smith Medical)
0,5 mm Polymer Optical Fiber (Edmund Optics # NT02-532).
Referenzen
- Hamelmann, E. Noninvasive measurement of airway responsiveness in allergic mice using barometric plethysmography. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 156, 766-775 (1997).
- Adler, A., Cieslewicz, G., Irvin, C. G.
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Nachdrucke und Genehmigungen
