Immunfluoreszenz-Assay: Eine Methode zur Identifizierung von Tumorzellen, die auf einem medizinischen Draht eingefangen wurden

Zusammenfassung

Quelle: Gallerani, G. et.al., Charakterisierung von Tumorzellen unter Verwendung eines medizinischen Drahtes zum Einfangen zirkulierender Tumorzellen: Ein 3D-Ansatz basierend auf Immunfluoreszenz und DNA-Fischen. J. Vis. Exp. (2017).

Dieses Video beschreibt die Technik der Immunfluoreszenzfärbung von zirkulierenden Tumorzellen, die auf einem funktionalisierten medizinischen Draht eingefangen wurden. Der funktionalisierte Draht ermöglicht die Isolierung von CTCs in vivo direkt aus dem Blutkreislauf des Patienten.

Protokoll

1. Immun-DNA FISH auf Draht

1. Spike-in der Zelllinie auf Draht (3D-Unterstützung)
   Anmerkung: Die Vorabvorbereitung beinhaltet eine genaue Auswahl der adhärenten Zelllinien auf der Grundlage der EpCAM-Positivität. Der Draht ist mit Anti-EpCAM-Antikörpern funktionalisiert, so dass nur EpCAM-positive Zellen gefärbt werden.
   Anmerkung: Berühren Sie nicht den funktionalisierten Teil des Drahtes, um Beschädigungen zu vermeiden.
   Anmerkung: Alle Schritte sollten unter einer Laminar-Flow-Haube unter sterilen Bedingungen durchgeführt werden.
   1. Resuspendieren Sie den gesam....

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Ethanol	Carlo Erba	# 414605
Tween 20	BIO RAD	# 1706531
PBS (Phosphatgepufferte Kochsalzlösung)	Medicago	# 09-9400-100
Aceton	Sigma Aldrich	# 534064-500ML
GUMMIZEMENT	Königliches Talens	# 95306500
EpCAM-FITC (Klon: HEA-125)	Mitenyi	#130-080-301
RPMI 1640	Gibco	# 31870-025
XT ALK BA	MetaSystems-Sonden	# D-6001-100-OG
Detektor CANCER01 EpCAM	Gilupi Nanomedizin		Funktionalisierter Draht
ZEISS Fluoreszenzmikroskop Axioskop	Zeiss
Nikon NIS-Elements BR 4.11.00 64 Bit Software	Nikon
Nikon DS-QiMc 12 Bit Digitalkamera	Nikon	DS-QiMc