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Methodenartikel
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30. April 2023
Quelle: Noel, P., et al. Vorbereitung und metabolischer Assay von 3-dimensionalen sphäroiden Co-Kulturen von Bauchspeicheldrüsenkrebszellen und Fibroblasten. J. Vis. Exp. (2017).
Dieses Protokoll beschreibt die Technik zur Durchführung eines extrazellulären Flussassays an 3D-Sphäroiden aus der Co-Kultur von Bauchspeicheldrüsenkrebszellen (Patu8902) und aktivierten Pankreasfibroblasten (PS1), um die beiden wichtigsten energieproduzierenden Wege, Glykolyse und mitochondriale Atmung, zu messen.
1. Metabolischer Assay von 3D-Pankreastumor-Sphäroiden für bioenergetische Signalwege mit dem Extracellular Flux Analyzer
HINWEIS: In diesem Abschnitt wird die Analyse der metabolischen Funktionen der Sphäroide unter Verwendung eines extrazellulären Flussanalysators mit Assay-Mikrotiterplatten beschrieben, der speziell für 3D-Sphäroide entwickelt wurde.
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| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| 96-Well-Platte für Zellabweisung | USA Scientific/ Griener Bio-One | Artikel-Nr.: 655970 | Sphäroid-Wachstumsfuge |
| D-Glukose | Sigma | Nr. D9434 | |
| DPBS (Englisch) | Gibco | Nr. 14190-144 | |
| Glykolyse-Stresstest-Kit | Agilent Technologien | Nr. 103020-100 | |
| L-Glutamin | Sigma | 59202C | |
| Mitochondriales Stresstest-Kit | Agilent Technologien | Nr. 103015-100 | |
| Patu8902-Zellen | Labor-Bestand | duktale Adenokarzinomzellen der Bauchspeicheldrüse | |
| PS1-Zellen | Labor-Bestand | aktivierte Sternzellen der Bauchspeicheldrüse | |
| RPMI1640 | Gibco | Artikel-Nr.: 11875-093 | Wachstumsmedien für Zellen, Sphäroide |
| SeaHorse XFe 96 extrazellulärer Flussanalysator | Agilent Technologien | extrazellulärer Flussanalysator | |
| Natriumpyruvat | Sigma | Nr. S8636 | |
| XF Basismedien | Agilent Technologien | Artikel-Nr.: 102365-100 | Basismedien für metabolische Assays auf XFe 96 |
