Schnelle Kultivierung primärer melanischer Melanozyten und Fibroblasten: Isolierung von Melanozyten und Fibroblasten aus einer ganzen Maushautprobe

Zusammenfassung

Quelle: Murphy, B. M. et al. Schnelle Erzeugung von primären murinen Melanozyten- und Fibroblastenkulturen. J. Vis. Exp. (2019)

Dieses Video beschreibt die schnelle Methode, die Melanozyten und Fibroblasten gleichzeitig aus der Haut des postnatalen Mauswelpen zu isolieren und zu kultivieren. Diese Zellen können in vitro erhalten und manipuliert werden, um die Zellbiologie der Haut, die Wundheilung und das Melanom zu untersuchen.

Protokoll

Alle Verfahren, die Tiere betreffen, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.

>1. Isolierung von Melanozyten und Fibroblasten

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1. bis 4 Tage alte männliche und/oder weibliche C57Bl/6J-Welpen werden durch Enthauptung eingeschläfert und die Extremitäten der euthanasierten Mäuse mit einer chirurgischen Schere entfernt.
2. Rollen Sie den Rüssel jeder Maus in einem Laminar-Flow-Schrank kurz in eine sterile Petrischale, die 70 % Ethanol enthält. Nehmen Sie den Rüssel aus dem Ethanol und legen Sie ihn in eine leere, sterile Petrischale.
3. Mach....

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Ethanol, 200 Proof	Fisher Scientific	22032601
Antibiotische Antimykotische Lösung (100x)	Sigma-Aldrich	Nr. A5955
McIlwain Gewebe-Zerkleinerer	Ted Pella	Nr. 10180
Tissue-Zerkleinerer-Klinge	Ted Pella	Nr. 121-6
Tissue Chopper Kunststoffscheibe	Ted Pella	Artikel-Nr.: 10180-01
Kollagenase Typ I	Worthington Biochemikalien	LS004156
Schweine-Trypsin	Sigma-Aldrich	85450C
Trypsin	VWR	VWRL0154-0100
G418 Disulfid	P212121	LGB-418-1
Dulbecco's Modifizierter Eagle Medium	Gibco	Tel.: 12800-082
RPMI 1640 Medien	Sigma-Aldrich	Nr. R8758
Phosphatgepufferte Kochsalzlösung von Dulbecco	Sigma-Aldrich	Nr. D8537
6-Well-Zellkulturschale	Sigma-Aldrich	SIAL0516
5 mL Polystyrol-Röhrchen mit rundem Boden	Fisher Scientific	352008
10 cm Zellkulturschale	Corning	430167
Rinderserumalbumin	Fisher Scientific	Nr. BP9706-100
Fötales Rinderserum	Sigma-Aldrich	Nr. 12306C
Corning Penicillin/Streptomycin-Lösung	Fisher Scientific	30-002-CL
Nährstoffmischung F-12 Schinken Medien	Sigma-Aldrich	Nr. N6760
Kollagen aus dem Rattenschwanz	Sigma-Aldrich	Nr. C7661
0,2 μm steriler PES-Spritzenvorsatzfilter	VWR	Tel.: 28145-501
40 μm Zellsieb	Fisher Scientific	22363547
70 μm Zellsieb	Fisher Scientific	22363548
Cholera-Toxin	Sigma-Aldrich	Nr. C8052
Pferde-Serum	Fisher Scientific	26050088
HyClone L-Glutamin	Fisher Scientific	SH3003402