의 사출. stephensi의 태아는 말라리아 방지 모기를 생성하는

Summary

아노 펠 레스 stephensi 모기가 말라리아 거주 인도 및 아시아 벡터입니다. 이 동영상은 모기에 말라리아에 대한 저항력을 부여합니다 transgenes이 종 microinjections을 수행하는 기법을 보여줍니다. 대부분이 동영상에서 보여주는 방법의 다른 모기 종의 microinjection 기술에 적용됩니다.

Abstract

모기의 genomes에 외인성 유전자의 도입은 관심의 특정 수종에 맞는 microinjection 기술을 필요로합니다. 이 비디오 프로토콜 변형 모기의 생성을위한 아노 펠 레스 stephensi의 배아에 DNA 구조를 microinject하는 제임스 실험실에서 사용하는 방법을 보여줍니다. , microinjection의 바늘을 준비하는 배아를 수집하고 준비하고 microinjection을 수행하기위한 기술은 그림입니다.

Protocol

microinjection 사전에 준비 : 혈액 공급 모기 : 월요일에서 이전 금요일에 수요일 피드 여자에 분사하십시오. 같은 주 월요일에 목요일과 금요일, 피드 여자를 삽입합니다. 프로그램 2 isotonic 버퍼 (자료 참조)를 사용하여 석영 바늘을 준비합니다. 배아에 대해 "튜브를 만들고 것은"일반 Drosophila 문화 약병입니다. 그것을 다루는 필터 종이 젖은 디스크와 …

Materials

Material Name	Typ	Company	Catalogue Number	Comment
Injection Quartz needles		Sutter Instrument		O.D.- 1.0 mm, I.D.-0.70, 10 cm length, are prepared by drawing capillary tubing into a fine 3-8 um with a shaft of approximately 100-300 mm micropipette puller.
Quartz puller	Tool	Sutter Instrument Co	P-2000	Set-up: Heat-275, Fil-3, Vel-38, Del-250, Pull-141
EndoFree plasmid kit		Quiagen
Isopropanol
Millex-GV column			SLGV RO4 NL	for DNA cleaning
Construct DNA				0.5 mg/ml
Helper plasmid				0.3 mg/ml
Injection solution	Buffer			1x solution: 5mM KCl, 0.1mM sodium phosphate, ph 6. 8
Isotonic buffer				see recipe in the protocol section
Dessication oil				Halocarbon oil 700:Halocarbon oil 27(1:1). Mix well. Prepare in advance of microinjection.
Blood				to feed mosquitos
Anopheles stephensi	Animal			Mosquitos, male and female.
Drosophila culture vial				for egg laying
Petri dishes				with isotonic buffer, for embryo hatching
Fine paintbrush				Sable # 0000
3MM Whatman paper
Forceps #5
double sided tape
Microloader		Eppendorf	5242 956.003
Transjector		Eppendorf
Microscope		Leica		with moving stage and micromanipulator, set at 10x magnification