निगरानी संरचना और रोधी संवेदनशीलता के परीक्षण के लिए एक 96 खैर microtiter प्लेट आधारित विधि Candida albicans Biofilms
Summary
हम के गठन के लिए एक सरल, तेजी से और मजबूत विधि का वर्णन<em> Candida albicans</em> Biofilms के भीतर कोशिकाओं की रोधी संवेदनशीलता परीक्षण में 96 अच्छी तरह से microtiter प्लेट और इसकी उपयोगिता का उपयोग biofilms.
Abstract
Candida albicans समझौता रोगियों और कैंडिडिआसिस के एक विस्तार जनसंख्या में फंगल संक्रमण का सबसे लगातार कारण बनी हुई है अब अमेरिकी अस्पतालों में तीसरे सबसे आम संक्रमण है. कैंडिडिआसिस के विभिन्न अभिव्यक्तियों biofilm गठन, दोनों मेजबान के ऊतकों और / या चिकित्सा उपकरणों (यानी कैथेटर) पर के साथ जुड़े रहे हैं. Biofilm गठन नकारात्मक नैदानिक निहितार्थ किया जाता है, के रूप में biofilms कोशिकाओं के भीतर मेजबान प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया से और antifungals की कार्रवाई से संरक्षित कर रहे हैं. हम एक सरल, तेज और मजबूत सी. के गठन के लिए इन विट्रो में मॉडल विकसित किया है 96 अच्छी तरह से microtiter प्लेट, जो भी biofilm रोधी संवेदनशीलता परीक्षण के लिए इस्तेमाल किया जा सकता का उपयोग albicans biofilms . इस परख के readout वर्णमिति metabolically सक्रिय कवक biofilm कोशिकाओं द्वारा XTT कमी (एक tetrazolium नमक) पर आधारित है,. एक ठेठ प्रयोग रोधी संवेदनशीलता परीक्षण के लिए एक अतिरिक्त 24 घंटे के साथ biofilm गठन के लिए लगभग 24 घंटे लगते हैं. अपनी सादगी और आमतौर पर उपलब्ध प्रयोगशाला सामग्री और उपकरणों के उपयोग की वजह से, इस तकनीक biofilm अनुसंधान democratizes और फंगल biofilms के रोधी संवेदनशीलता परीक्षण के मानकीकरण की दिशा में एक महत्वपूर्ण कदम का प्रतिनिधित्व करता है.
Protocol
Discussion
यहाँ हम एक सरल, तेजी से, किफायती और अत्यधिक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य Candida के एक वर्णमिति विधि है कि XTT का उपयोग biofilm के भीतर कोशिकाओं के चयापचय गतिविधियों के उपाय के साथ मिलकर biofilms के गठन के लिए 96 अच्छ?…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
प्रयोगशाला में biofilm से संबंधित काम अनुदान द्वारा वित्त पोषित है दंत चिकित्सा और craniofacial रिसर्च और नेशनल इंस्टीट्यूट ऑफ एलर्जी और संक्रामक रोगों JLL (आर) के लिए राष्ट्रीय संस्थान से R21DE017294 और R21AI080930 गिने. सामग्री केवल लेखकों की ज़िम्मेदारी है और करता NIDCR, NIAID या एनआईएच की आधिकारिक दृश्य जरूरी नहीं प्रतिनिधित्व करते हैं.
Materials
| Material Name | Typ | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Sabouraud-dextrose agar | Becton Dickinson | 211584 | To prepare plates for fresh subcultures of fungal isolates | |
| YPD: Yeast peptone dextrose | US Biological | Y2076 | Medium for propagation of overnight liquid cultures | |
| RPMI-1640 without sodium bicarbonate supplemented with L-glutamine | Cellgro | 50-020-PB | Liquid medium for biofilm formation | |
| Morpholinepropanesulfonic acid (MOPS) | Fisher | BP308 | To buffer RPMI 1640 | |
| Phosphate buffered saline, PBS | Sigma | P4417 | Buffer for washes | |
| XTT sodium salt | Sigma | X4251 | See above for preparation instructions | |
| Ringer’s lactate | Hospira | NDC0409-7953-09 | For preparation of XTT solution | |
| Menadione | Sigma | M5625 | Caution: hazardous by skin contact, inhalation or ingestion | |
| Petri dishes | Fisher | 08-757-12 | ||
| 15 ml conical centrifuge tubes | Corning | 430790 | ||
| 50 ml conical centrifuge tubes | Corning | 430828 | ||
| 96 well microtiter plates: Polystyrene, flat-bottomed, tissue culture treated | Corning | 3595 | ||
| Multichannel pipette and tips | Eppendorf | |||
| Incubator | Any | |||
| Microtiter plate reader | Any |
Referenzen
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