C57BL / 6 Mäuse wurden verwendet, um Hc Pathogenese zu studieren und bieten das beste Modell. Wir erforschen die potenziellen Vorteile der humoralen Immunität gegen diesen Pilz erzeugt und mehrere mAbs [zum Histon H2B und ein heat shock protein 60kDa], dass wir für ihre Schutzwirkung nach intraperitonealer Verabreichung getestet.
Ein Abonnement von JoVE ist erforderlich, um diesen Inhalt anzuzeigen. Melden Sie sich an oder beginnen Sie noch heute mit einer kostenlosen Testphase.
Methodenartikel
Passive Verwaltung von monoklonalen Antikörpern gegen H. capsulatum Ua Pilzpathogene
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Der Zweck der Anwendung dieser Methodik ist 1) unsere Fähigkeit voraus, um Menschen mit Antikörper oder Impfstoff zur Vorbeugung oder Behandlung Histoplasmose durch den Pilz Histoplasma capsulatum und 2) die Rolle der Virulenzfaktoren als Ziel für eine Therapie zu untersuchen schützen. Zur Erzeugung von mAbs, Mäuse immunisiert sind, sind die Immunreaktionen anhand einer Festphasen-ELISA-System in unserem Labor entwickelt und die besten Responder-Mäuse sind für die Isolierung von Milzzellen für die Fusion mit Hybridomzellen ausgewählt. C57BL / 6 Mäuse wurden ausgiebig verwendet, um H.-Studie capsulatum Pathogenese und bieten das beste Modell für die Beschaffung der erforderlichen Daten. Um die Rolle der mAbs in Infektion zu beurteilen, werden Mäuse intraperitoneal entweder mit mAb an H. verabreicht capsulatum oder Isotyp Kontroll-mAb und dann infiziert entweder durch intravenöse (iv), intraperitoneal (ip) oder intranasal (in) Routen. In der wissenschaftlichen Literatur setzt Wirksamkeit von mAbs gegen Pilzinfektionen bei Mäusen auf die Mortalität als Endpunkt, in Verbindung mit Kolonie formin Einheiten (KBE) Einschätzungen zu früheren Zeitpunkten. Survival (Zeit bis zum Tod) Studien sind notwendig, da sie am besten repräsentieren menschliche Krankheiten. So würde die Wirksamkeit unserer Maßnahmen nicht ausreichend, ohne Überlebenskurven ermittelt werden. Dies gilt auch für die Errichtung Wirksamkeit des Impfstoffes oder Prüfung von Mutanten für die Virulenz wahr. Mit Histoplasmose, die Mäuse oft als energisch, um tote über mehrere Stunden gehen. Die Kapazität einer Intervention, wie die Verwaltung eines mAb kann anfänglich zu schützen ein Tier aus Krankheit, aber die Krankheit kann Rückfall, die nicht in kurzer CFU Experimente realisiert werden. Zusätzlich zu Überleben und Pilz-Belastung Assays, untersuchen wir die entzündliche Antwort auf eine Infektion (Histologie, zelluläre Rekrutierung, Zytokin-Antworten). Für das Überleben / Zeit bis zum Tod Experimente werden die Mäuse infiziert und beobachtet mindestens zweimal täglich auf Anzeichen von Morbidität. Um zu beurteilen, Pilz-Belastung, Histopathologie und Zytokinreaktionen werden die Mäuse zu verschiedenen Zeitpunkten nach der Infektion eingeschläfert. Tierversuche sind nach den Richtlinien des Institute for Animal Studies der Albert Einstein College of Medicine durchgeführt.
Protokoll
1. Wachstum von H. Capsulatum
- Bereiten Sie eine Biosicherheitswerkbank für die Arbeit mit dem Pilz durch die Reinigung der Schrank mit 10% Bleichmittel durch 20 min UV-Bestrahlung gefolgt. H. capsulatum in der Hefe Phase erfordert Biosafety Level (BSL) II Praktiken, während die Form Form erfordert BSLIII. Verwenden Sie Hefe Form in den folgenden Schritten.
- Nächste bereiten ein 15 ml konische Röhrchen mit 5 ml PBS. Ernte eine Kolonie von H. capsulatum (Stamm ATCC Hc G217B) aus einer BHI Blutagarplatte [Glucose 10 g / L, Cystein 0,1 g / L, Penicillin-Streptomycin 1% und rote Blutzellen von Schafe....
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Diskussion
Das Protokoll hier vorgestellten zeigt, dass mAb an H. ist capsulatum ändern können Laufe der experimentellen murinen Histoplasmose. MAbs zu Zelloberflächenantigene von Krankheitserregern können die komplexe Dynamik, die während des Zusammenspiels zwischen einem Host und einem Erreger auftreten. Diese Studie stellt fest, dass mAbs Schutz in einem Mausmodell der tödlichen Histoplasmose vermitteln, wenn intraperitoneal, und es schlägt Kandidaten-Proteine für die Entwicklung von Impfstoffen, wie H2B, M-.......
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Offenlegungen
Keine Interessenskonflikte erklärt.
Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Bezeichnung des Gutes | Firma | ||
| Biologische Sicherheitswerkbank (BSL2) | |||
| 15 mL konischen Rohren | Falcon, BD | ||
| HAM F-12-Medium | Gibco | ||
| 37 ° C Schüttler | |||
| Wirbel | |||
| 50 ml konische Röhrchen | Falcon, BD | ||
| 26G1 / 2 Nadel | BD | ||
| 10 mL Spritze | BD | ||
| 250 ml Flaschen | |||
| FPLC (Fast Protein Liquid Chromatography)-System | GE Helthcare | ||
| ELISA-Reader | BioTek | ||
| Anästhesie (Ketamin und Xylazin) | |||
| Spalte steht | |||
| Nylon-String | |||
| Wärmelampe | |||
| 70μm Zelle Siebe | Falcon, BD | ||
| BHI-Agar-Platten | Gibco |
Referenzen
- Casadevall, A., Mukherjee, J., Scharff, M. D. Monoclonal antibody based ELISAs for cryptococcal polysaccharide. J. Immunol. Methods. 154, 27-35 (1992).
- Guimaraes, A. J., Frases, S., Gomez, F. J., Zancope-Oliveira, R. M., Nosanchuk, J. D. Monoclon....
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Nachdrucke und Genehmigungen
