Administración pasiva de anticuerpos monoclonales contra H. capsulatum Y otros hongos patógenos
Summary
Ratones C57BL / 6 se han utilizado para estudiar la patogénesis Hc y el mejor modelo. Estamos explorando los beneficios potenciales de la inmunidad humoral contra este hongo y generó varias Acm [de la histona H2B y 60kDa proteína de choque térmico] que la prueba de su eficacia protectora tras la administración intraperitoneal.
Abstract
El propósito de la utilización de esta metodología es: 1) para avanzar en nuestra capacidad para proteger a las personas con anticuerpos o vacunas para la prevención o el tratamiento de la histoplasmosis causadas por el hongo Histoplasma capsulatum y 2) para examinar el papel de factores de virulencia como blanco para la terapia. Para generar mAbs, los ratones son inmunizados, la respuesta inmune se evaluó a través de una fase sólida del sistema ELISA desarrollado en nuestro laboratorio, y la mejor respuesta ratones se seleccionan para el aislamiento de esplenocitos para la fusión con células de hibridoma. Ratones C57BL / 6 se han utilizado ampliamente para estudiar H. patogénesis capsulatum y el mejor modelo para la obtención de los datos requeridos. Con el fin de evaluar el papel de los mAbs de la infección, los ratones se administraron por vía intraperitoneal, ya sea con mAb a H. capsulatum o isotipo control pareado mAb y luego infectados por cualquiera vía intravenosa (iv), por vía intraperitoneal (ip) o intranasal (in) rutas. En la literatura científica, la eficacia de mAbs de las infecciones por hongos en ratones se basa en la mortalidad como punto final, junto con metformina unidades de colonias (UFC) evaluaciones en momentos anteriores. La supervivencia (tiempo hasta la muerte) son necesarios estudios a medida que mejor representan las enfermedades humanas. Por lo tanto, la eficacia de nuestra intervención no adecuada sería establecer sin curvas de supervivencia. Esto también es válido para establecer la eficacia de la vacuna o prueba de los mutantes de la virulencia. Con histoplasmosis, los ratones a menudo pasan de ser enérgico a los muertos durante varias horas. La capacidad de una intervención como la administración de un mAb inicialmente puede proteger a un animal de la enfermedad, pero la enfermedad recaída puede que no se llevaría a cabo en el corto experimentos UFC. Además de la supervivencia y los ensayos de carga de hongos, se analiza la respuesta inflamatoria a la infección (histología, el reclutamiento celular, las respuestas de citocinas). Para la supervivencia / hora para los experimentos de muerte, los ratones están infectados y controlados por lo menos dos veces al día para detectar signos de morbilidad. Para evaluar la carga de hongos, la histopatología, y las respuestas de citocinas, los ratones son sacrificados en las varias horas después de la infección. Los experimentos con animales se llevan a cabo de acuerdo con las directrices del Instituto de Estudios Animal de la Facultad de Medicina Albert Einstein.
Protocol
Discussion
El protocolo presentado aquí demuestra que el mAb a H. capsulatum puede modificar el curso de la histoplasmosis experimental murino. Anticuerpos monoclonales contra los antígenos de superficie celular de los patógenos puede modificar la compleja dinámica que se producen durante la interacción entre un huésped y un agente patógeno. Este estudio establece que la protección de los mAbs mediar en un modelo murino de la histoplasmosis letal cuando se inyecta por vía intraperitoneal, y sugiere las proteínas…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Name of Material | Company |
|---|---|
| Biological safety cabinet (BSL2) | |
| 15 mL conical tubes | Falcon, BD |
| HAM F-12 medium | Gibco |
| 37°C shaker | |
| Vortex | |
| 50 mL conical tubes | Falcon, BD |
| 26G1/2 needle | BD |
| 10 mL syringe | BD |
| 250 mL flasks | |
| FPLC (Fast protein liquid chromatography) system | GE Helthcare |
| ELISA reader | BioTek |
| Anesthesia (ketamine and Xylazine) | |
| Column stands | |
| Nylon string | |
| Heat lamp | |
| 70μm cell strainers | Falcon, BD |
| BHI agar plates | Gibco |
Referenzen
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