Single Drosophila Ommatidium Dissection und Imaging

Zusammenfassung

Der limitierende Faktor in der Verwendung der Erwachsenen Drosophila Blick auf Neurodegeneration und Zellbiologie Studie ist die schwierige Darstellung von intrazellulären Prozessen. Wir beschreiben die Zerlegung der einzelnen Ommatidien zu einer bona-fide primären neuronalen Zellkulturen, die Gegenstand der medikamentösen Behandlung und fortschrittliche Bildgebung erzeugen können.

Zusammenfassung

Die Fruchtfliege Drosophila melanogaster hat unschätzbare Beiträge zur neurowissenschaftlichen Forschung gemacht und wurde weithin als Modell für neurodegenerative Erkrankungen wegen seiner leistungsfähigen Genetik ¹ verwendet. Die Fliege Auge in allem hat das Organ der Wahl für Neurodegeneration Forschung, wobei der am besten zugänglichen und Leben entbehrlich Teil der Drosophila Nervensystem. Doch die große Einschränkung der intakten Augen ist die Schwierigkeit, wegen der intensiven Autofluoreszenz des Pigments, in der Bildgebung intrazelluläre Ereignisse wie Autophagie Dynamik ^2, die ausschlaggebend für das Verständnis der Neurodegeneration sind.

Wir haben vor kurzem die Präparation und Kultur der einzelnen Ommatidien ^3, die wichtig ist für unser Verständnis von autophagischen Dysfunktionen in einer Fliege Modell Dentatorubro-Pallidoluysian Atrophie (DRPLA) ^{3, 4} verwendet.

Wir berichten nun über eine umfassende Beschreibung dieser Technik (Abb. 1), von elektrophysiologischen Studien ^5, die voraussichtlich erheblich erweitern die Möglichkeit des Fly-Modelle für Neurodegeneration angepasst ist. Diese Methode lässt sich an Bild zu leben subzelluläre Ereignisse und wirksames Medikament Verwaltung auf Sehzellen Monitor (Abb. 2). Wenn in Kombination mit Mosaik-Techniken ^8.6 verwendet, können die Reaktionen von genetisch unterschiedlichen Zellen parallel getestet werden (Abb. 2).

Protokoll

1. Dissektion der Drosophila Netzhaut

1. Füllen Sie eine Vertiefung einer 3-Well Objektträger mit Phosphat-gepufferter Kochsalzlösung (PBS 1X) und dann zu betäuben fliegt von CO _2. Sowohl Männchen als auch Weibchen können für dieses Experiment verwendet werden.
2. Sobald die Fliegen betäubt sind, nehmen Sie eine Fliege mit einer Pinzette und legen Sie es in das Schälchen PBS.
3. Unter einem Binokular, kneifen den Rüssel mit einer Pinzette, und dann nehmen Sie den Kopf vom Körper durch Abtrennen der Hals mit einem zweiten Satz von Zangen.
4. Halten Sie die Fliege Kopf aus dem Rüssel, geschnitten längs der linken / recht....

Diskussion

Die einzelnen Ommatidium Dissektion hier vorgestellten ermöglicht das Speichern von tiefer zellbiologische Informationen über Prozesse wie Neurodegeneration, wenn in der Drosophila Auge nachempfunden. Der Photorezeptor Neuronen sind leichter zugänglich als andere Neuronen und sie Zytoplasma ist besonders groß, und damit geeignet, um Vesikel Dynamik Studie, in der selben Zellen kompetent in vielen Modellen verwendet werden, um Neurodegeneration in vivo zu quantifizieren. Der kritische Aspekt der Dissekt.......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Name des Reagenzes	Firma	Katalog-Nummer	Kommentare (optional)
Tragbare CO2 Dispenser	Flystuff	59-150	Refills auch
DUMONT Pinzette Nr. 5	AGAR Scientific	T5034
3-Well Glas Slide	EMS	71561-01
Micro Schere	VWR	HAMMHSB516-09
Schneider-Medium	VWR	733-1663
LysoTracker Red DND-99	Invitrogen	L7528
Superfrost Slides	VWR	631-0108
Vectashield mit Dapi	Vector Labs	H-1200
Deckgläser	VWR	631-1336