השיטה מתוארת בידוד ואפיון של תאי גזע אנושיים שיניים זולות (hDPSCs) באמצעות אחת<strong> דיסוציאציה האנזימטית של עיסה (DPSC-ED)</strong> או<strong> תולדה ישירה של תאי גזע מרקמת explants עיסה (DPSC-OG). לאחר מכן על ידי</strong><em> במבחנה</em> בידול השוואתי של שני סוגי hDPSCs לodontoblasts.
תאי גזע הם תאי clonogenic אשר מחזיקים שתי תכונות יוצאות דופן, הידועים כ- עצמה רבה והתחדשות עצמית 15. בין כל תאי גזע עם פוטנציות replicative שונות, תאי גזע שיניים כתאי גזע לאחר הלידה יכולים לעורר תשומת לב בשנים האחרונות בגלל הנגישות שלהם, הפלסטיות, ויכולת שגשוג גבוהה בהשוואה לתאי גזע בוגרים אחרים 16. אופייני, בדומה לתאי גזע mesenchymal, תאי גזע הם תאי עיסת שיני clonogenic חסיד שבו יש יכולת המרובה בידול לmesenchyme ו / או שושלות אינן mesenchyme, היא במבחנת in vivo. 1-8,17,18 DPSCs מזוהים על ידי הביטוי שלהם השלילי של אנטיגנים hematopoietic (למשל, CD45, CD34, CD14), וביטוי חיובי של CD90, CD29, CD73, CD105, CD44 וstro-1. 19,20
פוטנציאל להשיג קל עם כאבים ותחלואה מינימאליים לעשות DPSCs אדם כvaluמקור של תאי גזע מסוגל בהשוואה למקורות הרגילים, כגון תאי מח עצם mesenchymal גזע 21. באופן כללי, DPSCs היה מבודד על ידי אף אחת משיטות תולדה, כלומר, הגירה של תאי גזע מרקמת explants עיסה (DPSC-OG) 22-24, ו / או על ידי עיכול אנזימטי (DPSC-ED) 4,6,25. המחקרים קודמים הראו כי תנאי תרבות שיטת בידוד ויכולים לגרום לאוכלוסיות או שושלות שונות תחת במעברי המבחנה 26,27. במקרה של שיניים קבועות (pDPSCs), הואנג ואח' גילה כי pDPSCs מתעכל אנזימטית יש פוטנציאל התפשטות גבוהה יותר בהשוואה לDPSCs נחלץ מהם. 26 יתר על כן, במקרה של שיניים נשירות (dDPSCs), היא ההוכחה שstro-1 & CD34 סמנים הביעו יותר בdDPSC-ED בהשוואת dDPSC-OG. בנוסף, dDPSC-ED מוצג שיעור מינרליזציה גבוהה במדיום מוגדר osteo / odonto 27. לכן, בשל הפוטנציאל יוצא הדופן של DPSCs בrרפואת egenerative, מחקרים נוספים תידרש להבנה טובה יותר של אוכלוסיות שונות אפשריות אשר נגזרות משיטות בידוד שונות.
הנה, זה היה ניסיון להציג את הדרך קלה להפקת עיסה, באמצעות דיסק יהלום שיני צעד אחד כדי להקל על התהליך של מיצוי עיסה. יתר על כן, לאחר הבידוד של תאי גזע המופקים מעיסת אדם על ידי שימוש בשיטות ED או OG, תכונות כלליות ויכולת הבחנה בין שתי קבוצות היו גם נחקרו.
פרוטוקול זה מתאר את התהליך של בידוד ואפיון של hDPSCs מעיסת שיניים באמצעות שתי שיטות, דיסוציאציה האנזימטית ותולדה ישירה של תאי גזע מרקמת explants עיסה. בנוסף, בבידול במבחנה של תאים אלו לתוך odontoblasts, הוערך על ידי assay & S QPCR כמותית אליזרין האדום.
<p class="jove_content" style=";text-align:righ…The authors have nothing to disclose.
אנו מכירים תודה ד"ר ליילה Shakeri & ד"ר עארף Dournaei לדיסקוסם הקריטי ומר מוחמד רזא Khadem שריף לתומך הטכני שלו.
Name of the reagent | Company | Catalogue or Lot. number | Comments (optional) |
α-MEM | GIBCO | 11900-073 | |
Collagenase type I | Sigma-Aldrich | C0130-100MG | |
Dispase | GIBCO | 17105-041 | |
Penicillin/streptomycin | GIBCO | 15140-122 | |
Amphotericin B | GIBCO | 15290-018 | |
Fetal Bovine serum defined (FBS) | HyClone | SH30070.03 | |
L-ascorbic acid 2-phosphate | Sigma | A8960-5G | |
L-glutamine | GIBCO | 25030-024 | |
Dexamethasone | Sigma | D4902 | |
β-Glycerol phosphate disodium salt hydrate, BioUltra | Sigma | G9422-100G | |
Potassium phosphate monobasic | Sigma-Aldrich | P5655 | |
Osteogenesis Assay Kit | Millipore | PS01802031 | |
Mouse IgG2b-PE isotype control | BD pharmingen | 50808088029 | |
FITC mouse IgG2b isotype control | BD pharmingen | 559532 | |
FITC mouse IgG1 κ isotype | BD pharmingen | 11471471 | |
FITC/PE mouse anti-human CD34/CD45 | BD pharmingen | 341071 | |
PE anti-human CD146 | BD pharmingen | 550315 | |
Monoclonal mouse anti-human CD90/FITC | Daka | 00034418 | |
PE mouse anti-human CD73 | BD pharmingen | 550257 | |
Anti-h CD105/Endoglin PE | BD pharmingen | FAB10971P | |
PE mouse anti-human CD11b/Mac1 | BD pharmingen | 5553888 | |
CD44 PE mouse anti human | BD pharmingen | 555479 | |
Phosphate buffer Solution (PBS) | GIBCO | 003000 | |
70-μm cell strainer | Falcon | 352360 | |
0.2 μm syringe filter | Millex-GV | SLGV033RB | |
25 cm2 culture flask | Sigma-Aldrich | Z707481 | |
EQUIPMENT | |||
BD FACSCalibur | BD | 342975 | |
multiskan microplate spectrophotometer | Thermo scientific | 51119200 | |
Fleurcense Microscope | Olympus | ||
Flowing Software version 2.3.1 |