Парабиозе у мышей: подробный протокол
Summary
Парабиотического соединение двух организмов приводит к развитию общей системы кровообращения. В этом протоколе, мы описываем хирургические шаги по формированию парабиотического связь между мыши дикого типа и конститутивного GFP-экспрессирующих мыши.
Abstract
Парабиозе это хирургическая объединение двух организмов, позволяющих совместное использование кровообращения. Прикрепление кожу двух животных способствует формированию микрососудов в месте воспаления. Парабиотического партнеры поделиться своими циркулирующих антигенов и, следовательно, свободны от неблагоприятного иммунной реакции. Впервые описан Paul Bert в 1864 году 1, парабиозом операция была уточнена Бунстер и Мейера в 1933 для улучшения выживаемости животных 2. В текущем протокола, две мыши хирургически соединены следующие модификации Бунстер и Meyer техники. Животные подключены через локтевых и коленных суставов, после чего прикрепления кожи, позволяющей твердую поддержку, которая предотвращает нагрузку на ушивают кожи. Здесь мы подробно парабиотического присоединения вездесущий GFP, выражающей мыши дикого типа (WT) мыши. Через две недели после процедуры пара отделяется и GFP-положительных клеток могут быть обнаружены с помощью анализа проточной цитометрии в циркулирующей кровиион мыши мас. Химеризм крови позволяет изучить вклад циркулирующих клеток из одного животного в другой.
Introduction
Парабиозе, хирургическое соединение двух организмов, был впервые описан в 1864 году Полом Bert как способ разработки модель для изучения общих кровеносной систем и состоял из присоединение кожи и мышечных стенок двух крыс 1. Парабиозе способствует формированию микрососудов в месте воспаления 3 и имел несколько приложений в физиологических исследований, такие как гормональный связи между гипофизом и половыми железами, а также роли почек при гипертонической болезни 4. Кроме того, было использован для расследования вербовки и интеграции клеток-предшественников в неоваскуляризации 5, миграции гемопоэтических стволовых клеток 6 и торговли лимфоцитов 7, а также роли и кинетики циркулирующих воспалительных или стволовых клеток в метастазирования опухоли 8,9, и нейродегенеративные заболевания 10.
Одним из важных преимуществ парабиозе лжив том, что партнерские отношения животные имеют общие циркулирующие антигены, что позволяет миграцию клеток и образование новых сосудов, не вызывая иммунологическую реакцию. Важно отметить, что Вайсман и др.. Показали, что парабиозе между мужской и женской мышей не приводит к образованию анти HY антитела 11.
В оригинальной методике, описанной Полом Берт два животных были объединены через соединение кожи и мышечных стенок 1. Этот метод, однако, вызвало значительную нагрузку на животных и в результате высокой смертности из-за инфекции раны. С тех пор техника парабиозом был пересмотрен несколько групп с наиболее преобладающим является протокол, предложенный Бунстер и Мейера в 1933 2. Их метод включены присоединения лопатки суставов, полостей тела, и кожу, что позволяет более эффективную поддержку и меньше боли для животных. В то же время, новый метод привел к минимальной послеоперационного ухода и существенноственно снизилась смертность. Протокол, описанный здесь, является модификацией метода Бунстер и Meyer, что является менее инвазивным и позволяет тверже присоединения. А именно, мыши соединены через локтевых и коленных суставов, а также кожи. Это предотвращает присоединение расширение кожи и, следовательно, в меньшей степени вызывает боль и осложнений. Здесь мы опишем присоединение дикого типа (WT) взрослых мышей с конститутивным GFP, выражающей мыши. Мы показываем, что через две недели после операции мы можем достичь 50% химеризма крови демонстрируя эффективность этой хирургической процедуры, чтобы создать общую систему кровообращения.
Protocol
Representative Results
Discussion
Метод парабиозом обсуждается здесь представляет минимальные технические трудности и приводит к низкой смертности. Крепление коленных и локтевых суставов является значительное улучшение Бунстер и Meyer техники. Тем не менее, процедура остается инвазивной таким образом поддержание сте?…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Авторы хотели бы поблагодарить Adriane Мосли и Libuše Jerabek (Stanford) за помощь в хирургической техники.
Materials
| Name of equipment | Company | Catalog number |
| Isoflurane-Phoenix | Clipper | NDC 57319-559-06 |
| Posi-Seal Induction Chamber | Molecular Imaging Products | AS-01-0530-SM |
| Portable Anesthesia System | Molecular Imaging Products | AS-01-0007 |
| Gaymer T Pump | Gaymar Industries, Inc | TP650 |
| Warming Blanket (Heating pad) | Kent Scientific Corp | TP-22G |
| Curved forceps | Roboz | RS-5101 |
| Scissors | Fine Science Tools (FST) | FST 14063-09 |
| Needle holder | FST | FST 12501-13 |
| Electrical shaver | Oster | Golden A5 |
Referenzen
- Bert, P. Expériences et considérations sur la greffe animale. Journal de l’Anatomie et de la Physiologie. 1, 69-87 .
- Bunster, E., Meyer, R. K. Improved methods of parabiosis. Anat. Rec. 57, 339-380 (1933).
- Waskow, C. Generation of parabiotic mice for the study of DC and DC precursor circulation. Methods Mol. Biol. 595, 413-428 (2010).
- Finerty, J. C. Parabiosis in physiological studies. Physiol. Rev. 32, 277-302 (1952).
- Aicher, A., Heeschen, C. Nonbone marrow-derived endothelial progenitor cells: what is their exact location. Circ. Res. 101, e102 (2007).
- Abe, S., Boyer, C., et al. Cells derived from the circulation contribute to the repair of lung injury. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 170, 1158-1163 (2004).
- Donskoy, E., Goldschneider, I. Thymocytopoiesis is maintained by blood-borne precursors throughout postnatal life. A study in parabiotic mice. J. Immunol. 148, 1604-1612 (1992).
- Powell, A. E., Anderson, E. C., et al. Fusion between Intestinal epithelial cells and macrophages in a cancer context results in nuclear reprogramming. Cancer Res. 71, 1497-1505 (2011).
- Duyverman, A. M., Kohno, M., et al. A transient parabiosis skin transplantation model in mice. Nat. Protoc. 7, 763-770 (2012).
- Ajami, B., Bennett, J. L., et al. Local self-renewal can sustain CNS microglia maintenance and function throughout adult life. Nat. Neurosci. 10, 1538-1543 (2007).
- Weissman, I. L., Jerabek, L., et al. Tolerance and the H-Y antigen: Requirement for male T cells, but not B cells, to induce tolerance in neonatal female mice. Transplantation. 37, 3-6 (1984).
