The Proboscis Extension Response (PER) conditioning protocol, developed for the honey bee (Apis mellifera), provides an ecologically-relevant and easily quantifiable means for studying several different mechanisms of learning in many insect species.
Insecten passen hun reacties op door prikkels ervaring associëren die stimuli met gebeurtenissen belangrijk voor de overleving (bijvoorbeeld voedsel, partners, bedreigingen). Er zijn verschillende gedrags-mechanismen waardoor een insect leert saillante verenigingen en ze aan bij deze gebeurtenissen. Het is belangrijk om deze gedragsproblemen plasticiteit voor programma's die gericht zijn naar het bijstaan van insecten die nuttig zijn voor de landbouw zijn te begrijpen. Dit inzicht kan ook oplossingen ontdekken biomedische landbouwmachines problemen die insecten die fungeren als ziekte vectoren en plagen. De Proboscis Extension Response (PER) conditionering protocol is ontwikkeld voor honingbijen (Apis mellifera) meer dan 50 jaar geleden om te bestuderen hoe zij zien en te leren over bloemen geuren, die de nectar en stuifmeel middelen een kolonie nodig om te overleven signaleren. De PER procedure biedt een robuuste en eenvoudig te dienst kader voor het bestuderen van verschillende ecologisch relevante mechanismen van gedrags-plasticiteit. Het is eenvoudig aan te passen voor gebruik met verschillende andere soorten insecten en andere gedrags-reflexen. Deze protocollen kunnen gemakkelijk worden gebruikt in combinatie met verschillende middelen voor het toezicht neurale activiteit in het centrale zenuwstelsel via elektrofysiologie of Bio-imaging of voor het manipuleren gerichte neuromodulatory pathways. Het is een robuuste test voor het snel opsporen van sub-letale effecten op het gedrag veroorzaakt door milieu-invloeden, toxines of pesticiden.
We zien hoe de per protocol is eenvoudig te implementeren met behulp van twee procedures. Een geschikt als laboratorium oefening voor studenten of snel testen van het effect van een experimentele behandeling. De andere biedt grondiger controle variabelen, die in studies van gedragsconditionering. We tonen hoe verschillende maatregelen voor de gedragsreactie variërend van binaire ja / nee meer continue variabele zoals latentie en duur van zuigorganen verlenging kan worden gebruikt om hypotheses te testens. En bespreken we een aantal valkuilen die onderzoekers vaak tegenkomen als ze gebruik maken van de procedure voor de eerste keer.
Veel insecten leren over ecologisch relevante stimuli, en ze dan veranderen hun gedragsreacties op die prikkels om aan te passen aan nieuwe voorspellende relaties in hun omgeving. Verschillende mechanismen kan deze gedrags plasticiteit ten grondslag liggen (bijvoorbeeld nonassociative, associatief / Pavlov, en operante / instrumentaal 1). Deze soorten plasticiteit verschillen hoe de stimuli of gedrag geassocieerd met belangrijke gebeurtenissen, zoals het optreden van voedsel, een partner, of gevaar. Inzicht in deze vormen van plasticiteit is erg belangrijk voor fundamenteel onderzoek naar hoe het zenuwstelsel verandert om nieuwe herinneringen 2 coderen. Het is ook belangrijk voor het begrijpen van het adaptief gedrag van insecten die belangrijke dragers van de ziekte (bijvoorbeeld tseetseevlieg en muggen) en insecten die de landbouw belangrijk zijn, zijn, hetzij in de productie van gewassen (honingbijen) of als ongedierte.
Studeren gedragsmatige plasticiteit in een animal vereist een mate van experimentele controle over een aantal variabelen die niet haalbaar in het gebied 1. Het vereist de ontwikkeling van een robuust conditionering protocol dat kan worden ingezet onder meer gecontroleerde omstandigheden, maar die nog steeds het gedrag onder natuurlijke omstandigheden relevant. De honingbij (Apis mellifera) is een uitstekend model voor het maken van een protocol te ontwikkelen voor het uitvoeren van gecontroleerde onderzoek naar gedragsveranderingen plasticiteit 3,4. De Proboscis Extension Response (PER) in honing bijen is een natuurlijke gedrags reflex waarin de honingbij breidt zijn slurf in reactie op antennal stimulatie met een suikeroplossing. Tijdens normaal foerageergedrag, PER treedt op wanneer de honingbij vindt nectar in een bloem. Gelukkig zal bijen gemakkelijk vertonen deze eenvoudige en gemakkelijk kwantificeerbare gedrag in het laboratorium. Dit maakt het mogelijk om te bestuderen, in een gecontroleerde omgeving, de mechanismen die deze ecologisch relevante gedrag 5 beïnvloeden. PER can ook binnen een conditionering protocol gebruiken om stimulus perceptie en leren en geheugen onder verschillende behandelingsomstandigheden, die zijn ontworpen om de gedrags-en neurale mechanismen die ten grondslag liggen aan de plasticiteit 6 onthullen onderzoeken.
Sinds de eerste studies van Kuwabara 7, is PER conditioning op grote schaal gebruikt om nonassociative, associatieve en operante mechanismen die ten grondslag liggen aan gedrags plasticiteit in honingbijen 8 onthullen. Deze mechanismen zijn identiek aan die geopenbaard in studies van vrij vliegen honingbijen 9. In tegenstelling tot de studies van vrij vliegende bijen, kunnen PER conditioning protocollen worden gekoppeld met de elektrofysiologie 10,11 of levende cellen fluorescentie beeldvorming 12-14 van de hersenen. Bovendien PER protocollen zorgen voor experimentele manipulatie van zenuwbanen via farmacologische en moleculair genetische behandelingen om hypotheses over de rol van specifieke onderdelen van het netwerk, zoals neur testenomodulators 15,16. PER protocollen hebben ook een belangrijke manier om de subletale effecten van milieu-omstandigheden, alsmede toxines op de gezondheid en foerageergebied efficiëntie van honingbijen 17 te evalueren.
Deze procedure beschrijft twee geur levering methoden in parallel. Methode 1 is een versie van de geur en ongeconditioneerde stimulus (sucrose) levering die een goedkope en technisch eenvoudige werkwijze voor het presenteren van de geur en sucrose beloning verschaft. Deze methode is goed voor de basisopleiding en wanneer de automatisering niet mogelijk is. Het is een uitstekende manier om deze techniek om een klaslokaal of onderwijs laboratorium te introduceren. Tijdens het conditioneren experimenten met meer moeilijke taken en gekoppelde fysiologische conditie van geurwaarneming, leren of geheugen, is het zeer belangrijk om nauwkeurig en precies regelen de aanvang, duur levering timing van stimuli. Voor de meest betrouwbare stimulans levering, gebruik dan een middel van het automatiseren van de geur levering eennd een nauwkeurige methode van beloning levering. Methode 2 wendt geautomatiseerde geur levering en nauwkeuriger sucrose levering. Het is technisch geavanceerder en vereist meer voor de initiële setup dan methode 1, maar het verhoogt de consistentie van de timing en de hoeveelheid stimuli gebruikt voor het conditioneren en mogelijk moet worden gebruikt wanneer.
Dit protocol presenteerde twee betrouwbare methoden voor het conditioneren van het gebruik van de PER procedure. Dit zijn twee verschillende methoden die met succes zijn toegepast 27, 21. Wij gebruiken Methode 2 voor alle experimentele studies waarbij PER zoals het is altijd betrouwbaar, zelfs over verschillende onderzoekers.
Dezelfde fundamentele procedure is aangepast aan veel verschillende soorten studies met honingbijen, waaronder het gebruik van de verschillende conditionering stimuli en andere gedrags-reflexen. Ook is gekoppeld aan onderzoek naar de genetische basis van verschillen in het leren 28,29, de fysiologische correlaten van olfactorische perceptie en geheugen in de hersenen 13,14,30, en de modulerende en moleculair genetische basis van gedrag 15,16,31 . Vanwege de geavanceerde kennis van de ecologische relevantie van olfactorische leren honingbijen, die meer dan 100 jaar geleden begon met de eerste studies van Karl von Frisch <sup> 31, kunnen de resultaten van PER eenvoudig gekoppeld worden overlevingsbehoeften van een kolonie. Het meest recent, het is aangepast aan een agrarische studie naar de subletale effecten op het gedrag van bestrijdingsmiddelen en milieu-toxines 17 onderzoeken.
De basisprocedure is krachtig omdat het kan worden toegepast om problemen in andere soorten, en onderzoeken. Twee soorten nachtvlinders, Manduca sexta en Spodoptera littoralis, zijn gebruikt in PER studies naar de neurale basis van identificatie en geur olfactorische leervermogen 32,33 per soort 'onderzoeken. PER experimenten met fruitvliegjes hebben veel inzichten in de moleculaire signaaltransductie cascades betrokken bij chemosensation en leren 34. En PER is onlangs gebruikt om gewenning bij de vlooien (Rhodnius prolixus) 35, een belangrijke ziekteoverbrenger bestuderen.
In het algemeen is de procedure bestand tegen veranderingen in de; het gebruik van different methoden zullen waarschijnlijk tot dezelfde relatieve verschil tussen de behandelingsgroepen. Ondanks de relatief eenvoudige procedure kan meerdere problemen soms voorkomen dat de bijen uit het leren van de geur-sucrose vereniging. De volgende onderwerpen zijn mogelijk aanpassingen aan het protocol en een aantal van de meest voorkomende problemen die zich tijdens PER conditionering kunnen voordoen.
Overwegingen op aantal en type van Trials in de Conditioning Protocol
Elke leren protocol zal de blootstelling van de bijen nodig hebben om een aantal proeven in de acquisitie fase. Dit aantal hangt grotendeels af van de moeilijkheid van de taak. Honingbijen kan een eenvoudige taak na een eenmalige proef te leren, maar ze moeten op zijn minst een drie proeven op lange termijn geheugen induceren. Zoals verwacht, zal de honingbijen vereisen aanzienlijk meer proeven om een moeilijke taak adequaat te leren. Meestal is er een maximum aantal proeven waarna de bijen niet meer aanzienlijke verbetering van deir prestaties. Dit maximum is afhankelijk van de specifieke taak, de geur types en concentraties en de concentratie sucrose.
Bij gebruik van meer dan een type van de proef met verschillende geuren, geven de verschillende proces in een pseudo-willekeurige sequentie van de bijen te houden van het onthouden van een eenvoudige reeks geur presentaties plaats van het leren van de verschillen tussen de geuren 36. In deze pseudo-willekeurige reeksen, moet er een gelijk aantal pogingen voor elk van de geur types. Ook de waarschijnlijkheid van een proef van een geur soort wordt voorafgegaan en gevolgd door dezelfde geur, of een van de andere geuren, moeten gelijk zijn voor alle geuren zijn. Voor twee geuren – A en B – gebruik de volgende volgorde: ABBABAAB. Meer dan acht proeven elke geur wordt vier keer gepresenteerd. Aaneenschakelen identieke sequenties om het gewenste aantal proeven voor elke geur te bereiken.
Ongeacht proefopzet, zijn er een aantal parameters die moeten blijvenconstant om leren te optimaliseren. De overlap tussen de CS en de VS is van cruciaal belang voor een effectieve conditionering. De inter-trial interval (Figuur 1, Tabel 1) moet constant zijn en worden geoptimaliseerd omdat onregelmatigheid of een te korte of te lange inter-trial interval significant de effectiviteit van de conditionering protocol 1 kan beïnvloeden.
Overwegingen over het belang en Ontwerp van Behavioral Testen Trials
Reacties opgenomen tijdens de 'acquisitie fase' van een experiment, wanneer de CS en de VS samen worden aangeboden, kan nuttig zijn. Echter, pas op dat de geur presentatie voorwaarden kunnen verschillen van het ene type van de proef naar de andere. Tijdens versterkte studies wordt de geur gevolgd door sucrose gepresenteerd in combinatie met een visuele stimulus (beweging van de inrichting voor het leveren van de sucrose druppel) dat de bij reactie kan beïnvloeden. En de bijen hebben slechts drie secondens om een reactie (Figuur 1 vier seconden van geur stimulatie minus de ene sec overlap met sucrose presentatie) tonen. Als het experiment betreft de bijen leren om twee geuren te onderscheiden (bijvoorbeeld, gewapend en ongewapend), de ongewapende geur gepresenteerd op alternatieve proeven gebeurt zonder de visuele prikkel van de beloning presentatie en de bijen hebben de volle vier seconden om te reageren. Daarom, de antwoorden op de twee geuren zijn niet volledig vergelijkbaar tijdens de overname. Met de conditionering protocol, niet alleen vertrouwen op overname bochten 1. Om beter te vernemen welke bijen geleerd, voeren een reeks versterkte testproeven, waarbij noch geur versterkt, die ervoor zorgt dat het testen van alle stimuli plaatsvindt onder identieke omstandigheden.
Afhankelijk van het specifieke doel van het experiment, kan testen bestaan uit enkele testproeven van de geconditioneerde geur of een reeks onderzoeken met de geconditioneerde odof of een combinatie van de geconditioneerde en nieuwe geuren. Een enkele test proces van de geconditioneerde geur zorgt voor een eenvoudige analyse van de vraag of de bijen 'Onthoud de geconditioneerde geur. Kan echter voor de eerste proef proef motivatieniveau de bijen en hun gevoeligheid van de geconditioneerde geur geven. Een serie proeven, ofwel een serie proeven uitsterven van de geconditioneerde geur of een reeks afzonderlijke onderzoeken van de geconditioneerde en een of meer nieuwe geuren, kunnen ook worden gebruikt om geheugen te beoordelen. De serie van uitsterven proeven kunnen beoordelen hoe sterk de bijen 'Onthoud de geconditioneerde vereniging. Hoe sterker de recall het groter aantal studies die nodig zijn om de geconditioneerde respons te blussen. Een reeks van enkele testen van geconditioneerde en nieuwe geuren kunnen ook de specificiteit geheugen van de geconditioneerde geur van de bijen te evalueren.
Het is ook noodzakelijk te conditioneren en test zowel controle en behandelde groepen tegelijkertijd punten. Comparing van de prestaties van de bijen snel na conditionering voor bijen gehouden voor langere tijd is problematisch, omdat de blootstelling aan de sucrose VS door het voeren van de bijen tot verzadiging. Bijvoorbeeld, kan een afname van de prestaties na lange intervallen omdat het geheugen verval of het kan te wijten zijn aan veranderingen in motiverende toestand en / of leren geïnduceerd door versterkte blootstelling aan de VS, waardoor de resultaten ambigu. Derhalve prestaties van een behandelingsgroep altijd worden beoordeeld ten opzichte van een controlegroep geconditioneerd en getest op dezelfde tijdstippen.
Geur Concentratie en Integriteit
Er zijn verschillende manieren waarop de concentratie en integriteit van de geur (CS) kunnen worden aangetast. Het meest voorkomende probleem met geur levering de uitputting van geur cartridges overmatig (figuur 2). Vervang de cartridges 10-12 gebruik (om de 2 of 3 studies met groepen van 5 honingbijen) om deze valkuil te vermijden. Het is ook kritisch te gebruikenverse cartridges voor test-trials, omdat de gebruikte cartridges differentieel kan worden uitgeput en dus aanwezig ongelijke geur stimuli. Een ander bekend probleem geur cartridge vervuiling door met de cartridge voor meerdere geur zonder volledig reinigen. Een vuile of vervuilde luchtstroom kan ook onbedoeld introduceren extra olfactorische stimulus (actieve kool filters kan achtergrond besmetting te voorkomen). Dit is vooral problematisch wanneer het koppelen PER conditionering met metingen van de fysiologische reacties op de geur. Leaky geur cartridges een probleem vormen, omdat de bijen worden blootgesteld voordat het proces begint, waarin de saillantie van de geur prikkel vermindert om de geur. Loszittende op de luchttoevoer voor de geur levering kan leiden tot weinig of geen geur levering wanneer de klep wordt geopend, kunstmatig respons van de bijen aan het beoogde geur verminderen.
Sucrose-oplossing en ongeconditioneerde stimulus (Beloning)
De eenmount, concentratie, en de integriteit van de sucrose-oplossing gebruikt als de VS zijn van vitaal belang voor het succes van het experiment. Conditioning is een functie van de hoeveelheid en concentratie van sucrose-oplossing in water als de Amerikaanse 37. De micrometer spuiten van methode 2 toestaan voor zeer nauwkeurige (tot 0,2 pl) zeggenschap over Amerikaanse levering, en wij raden ze met behulp van beide methoden beschreven. Gebruik van de tandenstokers (Methode 1) voldoende voor omstandigheden waarin de dure spuiten niet kan worden gebruikt, zoals in de opleiding van grote groepen studenten, werk in het veld, of met lagere budgetten. Zorgvuldige implementatie van methode 1 is prima, zolang de timing wordt onderhouden met regelmatige vervanging van tandenstokers om afzettingen van sucrose (en de concentratie geleverd) te vermijden. Het gebruik van tandenstokers is het moeilijker nauwkeurig te regelen en schat de hoeveelheid en grootte van de Amerikaanse geleverde, wat belangrijk is voor het conditioneren studies 1. De concentratie sucrose nodigeen voldoende beloning voor de bijen gemotiveerd aan het geconditioneerde vereniging kom kan afhangen van de moeilijkheid van de taak en interne toestand van de bijen of jaargetijde houden. De moeilijkere taken vereisen een hogere sucrose-oplossing voor de bijen 'om de taak met succes te leren. Schimmel kan opbouw in sacharose-oplossingen, zelfs bij 5 ° C, waarbij de integriteit van de oplossing in het gedrang brengt, die de gezondheid en de perceptie van de beloning van de bijen tijdens het experiment. Het beste is om de oplossing te vervangen om de paar dagen.
Precisie, timing, en de consistentie van CS en de US, de levertijd
Het meest kritieke punt over de juiste uitvoering van een PER procedure, of wat dat betreft elke conditionering procedure, houdt precisie, timing en consistentie van de CS en de US levering (figuur 1). Onderzoekers die nieuw zijn op de procedure vaak onnauwkeurig over de levering van een of beide stimuli. ISI'sdie niet om voor overlap CS en Amerikaanse resulteren in slechte prestaties conditionering. De PLC automatiseert een akoestisch signaal voor de experimentator sucrose 3 sec leveren na het begin van geur levering. Onderzoekers moeten de sucrose / water druppel dicht bij de bijen voor een snelle levering na het signaal vast te houden. Deze procedures helpen meevoeren een consistente ISI. Het plaatsen van een stopwatch door de conditionering arena zorgt voor een gemakkelijke tijd plaatsing van de proef, alsmede de controle op de tijd van de bijen in de arena, zowel voor als na levering van stimuli. Zo ITI kan betrekkelijk consistent zijn en de gehele procedure kan met een geregelde snelheid worden uitgevoerd. ITI dat te kort zijn, bijvoorbeeld minder dan 1 min, of te lang kan leiden tot slechte conditionering rendement 1.
Seizoensgebonden, milieu-, en contextuele effecten op Honey Bee Prestatie
Prestaties van honingbijen 'kan aanzienlijk worden beïnvloed door zijn omgevingzowel voor als tijdens het conditioneren. Vaak zal de schommelingen in de temperatuur en de beschikbaarheid van voedsel die met de veranderende seizoenen motivatie van de bijen om te leren veranderen. Wanneer de bloemen in bloei staan, de motivatie van de bijen om te leren de geconditioneerde vereniging in het lab af 38. Wanneer de kolonie wordt benadrukt – van extreme temperaturen, voedseltekorten, of-ziekte stress – de bijen 'zal een vermindering van hun leerprestaties binnenkant laten zien. Honingbijen bewaard in een vlucht kamer kan goed leren voor een tijdje, maar er ook de stress van de ziekte en veroudering degraderen hun leerprestaties in de tijd. De context tijdens het conditioneren kunnen ook de prestaties van de bijen 'te verlagen. Vreemde geuren, beweging, en andere stimuli kunnen de bijen af te leiden uit de experimentele stimuli. Om dit probleem te voorkomen, handhaven van een redelijk consistent, vereenvoudigde visuele context.
Genotype en ervaring beïnvloedt per voorstelling
<p class = "jove_content"> Honey bee werknemers kunnen aanzienlijk verschillen in prestaties op de conditionering procedure wegens taakspecialisatie, genotype, of andere omgevingsfactoren 20. Daarom is het belangrijk te standaardiseren, zoveel mogelijk, de soorten dieren gebruikt in een experiment om inter-individuele variatie te verminderen. In een kolonie geleid door een open-paarde koningin, wat betekent dat ze gepaard met veel verschillende drones, zullen de werknemers verschillen in vaderlijke genotype. Genetische achtergrond kan leiden tot dramatische verschillen in sensorische respons 39 en leerprestaties 29. Met behulp van kolonies geleid door koninginnen instrumentaal geïnsemineerd met sperma van enkele drones 28 vermindert dit inter-individuele variatie.De hierboven beschreven protocollen, inclusief een methode voor het verzamelen van honing bij werknemers uit het nest ingang. Echter, deze bijen verschillen van elkaar wat betreft leeftijd of gedragstaak. Ze is nog jong (inexperienCED) of ouder (meer ervaren) verzamelaars. Het kan gaan om jonge bijen die hun eerste oriëntatie vluchten. Of ze ook mogen zijn bewaker bijen. Om de variabiliteit te verminderen, markeer de bijen met een sneldrogende lakverf of markeerlabels hetzij als ze zich voordoen als volwassenen (om te controleren voor de leeftijd) en / of als ze beginnen foerageren (om te controleren voor de ervaring). Dan, een paar dagen later, het verzamelen van de gemarkeerde bijen voor het conditioneren. Werknemers die betrokken zijn bij de verpleging gedrag kan worden afgehaald bij de frames binnen de korf. Verpleegkundigen kunnen positief worden geïdentificeerd als ze voegen hun hoofd in een broedcel te voeden en de zorg voor de larve binnen.
Met behulp van Virgin Queens of Drones voor PER Conditioning
Naast werknemer honingbijen, kan maagd honingbij koninginnen en darren gemakkelijk worden geconditioneerd in een PER procedure voor studies die gericht zijn op het ontwikkelen van genetische lijnen van honingbijen die verschillen in leerprestaties 28. Maagdelijke koninginnen moet binnenkort worden afgehaald na they komen uit verpopping en direct in straatverbod harnassen geplaatst zonder verdoving. Jonge, onvolwassen drones verzameld uit het broed kam in de kolonie zijn over het algemeen niet gemotiveerd om te leren. Nadat ze zijn begonnen paring vluchten, drones gemakkelijk leren PER taken 28. Ze moeten worden verzameld als ze 's nachts terug te keren van een paring vlucht en in een kleine kooi in een kolonie wordt gebruikt voor het opfokken van koninginnen. Probeer niet om ze te benutten de dag voor conditionering; ze niet goed overleven in harnassen overnachten. Een paar uur voor het conditioneren van de drones kunnen worden afgehaald bij de kooien en geplaatst in het straatverbod harnassen zonder verdoving.
Conclusies
Deze PER procedure, zoals methoden bedraagt uitgangspunt voor het ontwerpen PER experimenten. De meeste PER protocollen vereisen dat de procedure van een gewijzigd worden om de specifieke doelen van het experiment en accomm implementerene verschillende behandelingsgroepen. Het is eenvoudig te implementeren. Echter, een goede uitvoering vereist aandacht voor detail en de praktijk. Eenmaal onder de knie kan een krachtige procedure om toe te voegen als een research tool voor meerdere fundamenteel en toegepast onderzoek programma's met verschillende soorten insecten zijn.
The authors have nothing to disclose.
Dit onderzoek werd gesteund door de financiering van NIH NCRR (R01 RR014166 aan BHS), NIH NIDCD (R01 DC011422 BHS co-PI), het Amerikaanse ministerie van Landbouw (J trumble PI; BH Smith co-PI) en Arizona State University. De financiering voor de workshop aan studenten (data in figuur 4) te trainen werd verstrekt door de Stichting van de Wetenschap van Chili.
Name of Material/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
Sucrose | Sigma-Aldrich | S9378-1KG | |
Odorant compounds (for example): | For additional examples of odorants, see any of the papers on olfactory processing from the Smith lab | ||
1-hexanol | Sigma-Aldrich | 471402-100ML | |
2-octanone | Sigma-Aldrich | W280208-800G-K | |
heptanol | Sigma-Aldrich | 51778-5ML | |
gerianol | Sigma-Aldrich | 163333-25G | |
nonanal | Sigma-Aldrich | 131210-100ML | |
Hexane | Sigma-Aldrich | 296090-1L | |
Heavy Mineral Oil | Sigma-Aldrich | 330760-1L | Make sure it’s odorless |
Ethanol | Sigma-Aldrich | 459836-1L | |
Scintillation vials | Sigma-Aldrich | Z190535-1PAK | Use a small drill bit to bore a small hole in the cap of the vials |
Bee harness | Custom-made from 0.9 cm diameter plastic soda straws or hard plastic/metal tubing | ||
Duct tape | |||
Kimwipes | Sigma-Aldrich | Z188956-1PAK | |
Wash bottles | Sigma-Aldrich | Z560847-3EA | For the 70% ethanol |
Small fan in mountable housing | |||
Dryer tubing | |||
FOR METHOD 1 ONLY | |||
Name | Company | Catalog Number | Comments |
20 ml disposable plastic syringes | Cole-Parmer | WU-07945-18 | |
15 mm filter paper circles | Sigma-Aldrich | Z274844-1PAK | |
Pushpins | |||
Toothpicks | |||
FOR METHOD 2 ONLY | |||
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Gilmont Micrometer syringe, 0.2 mL | Cole-Parmer | EW-07840-00 | |
Gilmont micrometer syringe tip | Cole-Parmer | EW-07841-00 | |
26G 3/8” Leur hub hypodermic needles | Fisher Scientific | 14-826-10 | |
1cc tuberculin syringes (plastic/glass) | Sigma-Aldrich | Z181641-1EA OR Z192090-200EA | glass tuberculin syringes are available, but plastic syringes are much less expensive and will work well for a limited number of uses |
Small rubber/silicone restrictors | Cole-Parmer | EW-95702-02 | Made from 4.8 mm outer diameter silicone tubing or the rubber tips of the 1 cc syringe plungers |
Parafilm | Sigma-Aldrich | P7793-1EA | |
75 X 100 mm filter paper | Sigma-Aldrich | Z695106-500EA | |
Direct Logic 05 Programmable Logic Controller | Koyo Electronics Industries Co, Ltd | http://www.koyoele.co.jp/ OR english/support/dlc.html#plc | |
1 mm, 4mm & 6 mm inner diameter PVC or silicone tubing | Cole-Parmer | Various | Cole-Parmer has a wide selection of suitable tubing |
Polypropylene connectors & leur fittings | Cole-Parmer | Various | Cole-Parmer has a wide selection of connectors and fittings for many tube sizes |
65-mm Correlated Flowmeter | Cole-Parmer | EW-03216-08 | Aluminum with Glass float; For Liquids and Gases, With Valve |
OR | |||
Tetra Whisper 300 (Tetratek DW96-2) Aquarium Air Pump | Aquacave | AE-TETRA-300 | www.aquacave.com |
LIF series Solenoid Valves for .042 " ID Tubing, Configuration "E" | The Lee Company | LFAA1200118H | Neoprene, 430 SS, 302 SS, 280mWatts http://www.theleeco.com/LEEWEB2.NSF |
PC-Board 12VDC 70dB Piezo Buzzer | RadioShack | 273-074 | www.radioshack.com |