Maus-Modell der Alloimmune-induzierte Gefäßabstoßung und Transplantat-Arteriosklerose

Zusammenfassung

Wir beschreiben ein Protokoll für die Aorteninterpositionstransplantation bei Mäusen. Ziel des Protokolls ist es, ein Modell zur Verfügung zu stellen, mit dem pathologische Prozesse und therapeutische Strategien, die für alloimmune Reaktionen in den Arterien relevant sind, und die daraus resultierenden arteriellen Veränderungen, die zum Versagen von Organtransplantaten beitragen, untersucht werden können.

Zusammenfassung

Vaskuläre Abstoßung, die zu Transplantatarteriosklerose (TA) führt, ist die führende Darstellung für chronisches Herztransplantationsversagen. Bei der TA verursacht das Immunsystem des Empfängers eine Schädigung der Arterienwand und eine Funktionsstörung der Endothelzellen und der glatten Muskelzellen. Dies löst eine pathologische Reparaturreaktion aus, die durch eine Intimalverdickung und einen luminalen Verschluss gekennzeichnet ist. Das Verständnis der Mechanismen, durch die das Immunsystem die Abstoßung von Gefäßen und TA verursacht, kann die Entwicklung neuartiger Wege zur Behandlung von Transplantatversagen unterstützen. Hier beschreiben wir ein Maus-Aorten-Interpositionsmodell, mit dem die pathogenen Mechanismen von vaskulärer Abstoßung und TA untersucht werden können. Das Modell beinhaltet die Transplantation eines Aortensegments von einem Spendertier in einen allogenen Empfänger. Die Abstoßung des Arterienabschnitts geht mit alloimmunen Reaktionen einher und führt zu arteriellen Veränderungen, die einer Gefäßabstoßung ähneln. Der grundlegende technische Ansatz, den wir beschreiben, kann mit verschiedenen Mausstämmen und gezielten Interventionen verwendet werden, um spezifische Fragen im Zusammenhang mit vaskulärer Abstoßung und TA zu beantworten.

Einleitung

In den vergangenen mehr als 30 Jahren haben Fortschritte in der Immunsuppressiva Transplantatabstoßung aufgrund von akuten Abstoßung verringert, sondern chronische Abstoßung bleibt eine zentrale Herausforderung. Die wichtigste Manifestation der chronischen Herztransplantatabstoßung ist Transplantat-Arteriosklerose (TA) ^1,2. Dieser Zustand wird durch Intimahyperplasie und vasomotorische Dysfunktion Allotransplantat Arterien charakterisiert und entwickelt sich als Folge der immunologischen Targeting von Endothelzellen und glatte Muskelzellen des Empfängers Immunsystems. Die spezifische Ausrichtung des Transplantats Gefäßsystem durch Anerkennung ausländischer....

Protokoll

Alle Protokolle in dieser Studie wurden überprüft und von der Simon Fraser University Tierpflege Ethik-Kommission genehmigt. Verwenden Balb / CYJ (H2 ^d) Spendermäusen und C57BL / 6 (H2 ^b) Empfängermäuse zu allogenen Reaktionen zu untersuchen. Mäuse werden für Experimente im Alter von 8 bis 12 Wochen zwischen verwendet. Verwenden Sie entweder weiblichen oder männlichen Mäusen. Syngenen Kontrollen bestehen aus Aortasegmente von C57BL / 6-Geber in C57BL / 6-Empfänger.

1. Spender und Empfänger Vorbereitung

Anmerkung: Sowohl der Spender und Empfänger anästhesiert und vor der Operation bereit, Ischämie des Transplant....

Ergebnisse

In diesem Modell wird die Bauchaorta, die von einer Balb / CYJ Maus in der infrarenalen Aorta einer C57BL / 6-Empfänger angeordnet ist. Dies ermöglicht eine umfassende Bewertung der Alloimmune Reaktionen, Transplantat Arterien Ziel. Immunvermittelte Gefäßverletzung in diesem Modell initiiert Gefäß reparative Antworten, die in Verdickung der Intima, Lumeneinengung und die Rekrutierung von Immunzellen gipfeln (Abbildungen 1 und 2). Diese Kriterien dann als Auslese für die Schwere der Allo.......

Diskussion

Wir haben ein Protokoll für Aorten Zwischen Pfropfung bei Mäusen, die zur Untersuchung von immunvermittelten Gefäßabstoßung und TA beschrieben. Dieses Modell kann verwendet werden, um die Ursachen der TA als auch die Entwicklung neuer therapeutischer Strategien zu untersuchen. Es hat in der Vergangenheit verwendet, um eine wesentliche Rolle der adaptiven Immunität, zytotoxische T-Zellreaktionen, Zytokin-vermittelte CD4 T-Zell-Effektor-Reaktionen und Antikörper-vermittelte Transplantatschäden TA ^14,17-21 herzu.......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
C57BL/6J (H-2b)	Jackson Laboratories, Bar Harbour ME	Stamm# 000664
Balb/cBYJ	Jackson Laboratories, Bar Harbour ME	Stamm# 001026
Ketaminhydrochlorid Injektion USP 100 mg/ml	Ketalean	DIN 00612316
Xylazin Injektion 20 mg/ml	Rompum	DIN 02169592
Ketoprofen Injektion 100 mg/ml	Anafen	DIN 01938126
Butorphanol Tartrat  Injektion 10 mg/ml	Torbugesic	DIN 008450000
Buprenorphin Injektion 0,3 mg/ml	Reckitt Benckiser	B.N. 5241
Atipamezolhydrochlorid sterile injizierbare Lösung	Antisedan	DIN 02237744
Heparin-Natrium-Injektion, USP, 1.000 Einheiten/ml	McKesson Verteilung	DIN 02264315
Tränen natürliche Augensalbe	Alcon	DIN 02082519
Stereomikroskop	Leica	M80
0,9% Natriumchlorid, steril	Baxter Corporation
Lactated Ringer' s Lösung, steril	Baxter Corporation
0,9% Natriumchlorid Injektion, steril, 10 ml	Baxter Corporation
Alkohol Vorbereitungspads	Loris
Povidon Jod	Betadin
Chlorhexidin Gluconat 4% w/v	Germi-Stat
Schwarz Polyamid Monofilament	AROSurgisch Instrumente	T4A10Q07
Nahtmaterial, 10-0 Nahtmaterial, 70 Mikron	Corporation
Blue Monofilament Naht 5-0, P3 Nadel	Ethicon	8698G
1 ml Spritze	BD	REF 309659
10 ml Spritze	BD	REF 309604
1cc TB Insulinspritze mit 28 G 1/2	BD	REF 309309
25 G 7/8, Injektionsnadel	BD	REF 305124
27 G 1/2, Injektionsnadel	BD	REF 305109
Colibri Retractor- 1,5 cm Spreizung 4 cm	Fine Science Tools	17000-04
S& T CAF-4 Clip-Greifzange, ohne Schloss	Fine Science Tools	00072-14
Supergrip-Pinzette, S& T	Fine Science Tools	00632-11
Medical Nr.5 Pinzette	Fine Science Tools	11253-20
Lexer Babyschere	Fine Science Tools	14078-10
Micro Adson-Pinzette gezahnt	Fine Science Tools	11018-12
Vannas-Tübingen Mikroschere	Fine Science Tools	15003-08
Mikroklemmen, b-1; 3,5 mm x 1 mm; 7mm Länge	Fine Science Tools	00396-01
Graefe-Pinzette, 10cm 1x2 Zähne	Fine Science Tools	11054-10
Castroviejo mit Schloss und Wolframbacken	Fine Science Tools	12565-14
Heißglasperlensterilisator	Inotech 250	IS-250 - Steri-250
Vliesgaze	Progene
Cotton Tiped Applikatoren	Puritan
Bartschneider	Wahl
Heizkissen	Sunbeam