与人体组织转化为癌症研究工作
Summary
Translational cancer research is dependent on extraction of human tissues. Much work has gone into optimizing extraction methods for ex vivo analysis. Here, we describe tissue processing methods allowing for maximal data output from limited samples.
Abstract
Medical research for human benefit is greatly impeded by the necessity for human tissues and subjects. However, upon obtaining consent for human specimens, precious samples must be handled with the greatest care in order to ensure integrity of organs, tissues, and cells to the highest degree. Unfortunately, tissue processing by definition requires extraction of tissues from the host, a change which can cause great cellular stress and have major repercussions on subsequent analyses. These stresses could result in the specimen being no longer representative of the site from which it was retrieved. Therefore, a strict protocol must be adhered to while processing these specimens to ensure representativeness. The desired assay(s) must also be taken into consideration in order to ensure that an optimal technique is used for sample processing. Outlined here is a protocol for tissue retrieval, processing and various analyses which may be performed on processed tissue in order to maximize downstream production from limited tissue samples.
Introduction
医学研究已经从两个人细胞系和动物模型的研究受益匪浅。细胞系允许在系统中更好控制元件，以及使用的细胞从适当的生物体。正与人体细胞，而更具有代表性，提出了这可能是负责健康和疾病机制大大简化快照，因为细胞系可能不概括其它细胞，基质组分，并且可能影响反应1器官的影响。另一方面，动物模型中，虽然不是完全准确的再现人类疾病和遗传异质性，提供通过允许整个动物系统在大多数型号2,3输入进一步洞察。
缺点不谈，这两种方法都有其优点和是互补的。然而，主要的目标仍然是研究人类细胞和器官，在一个完整的身体，多器官系统。因此，翻译研究具有德恩在促进人体器官和组织中提取患者的研究中，为了更好地把握机制潜在的疾病了长足的发展。转化型研究提供了研究的治疗和疾病导致的整个身体，在适当的细胞中，从而提供了两全其美的细胞和动物实验4之间的优势。
转化的研究也并非没有缺陷。从人类患者收获标本，在除去从该主机，立即经受缺血和从它们将被保护，否则其他外部因素。这可能导致应力诱导的分子和遗传变化，并导致偏压在随后的研究。因此，很多努力已投入通过严格的方法提取和处理组织，以最好的保护器官和细胞的完整性对下游的研究5。重要的是，未来的应用必须紧密选择方法□当考虑˚F处理人样品，如某些方法可能是有害的细胞成分和信号通路，同时保留其他。
对于涉及人体组织的任何研究，监管问题必须得到解决。之后塔斯基吉和贝尔蒙特报告，人们越来越接受了生物医学研究与固有的风险往往造成不可避免的伦理困境6有关的事实。需要国家标准被认可和联邦政府创建的机构审查委员会（IRB），以维护正当贝尔蒙特报告的原则（尊重个人，善行，正义）的手段。
任何机构的内部评级法是医生，研究人员和社区成员是谁负责保护研究参与者组成的委员会。它要求自愿同意从生物医学研究研究，所有参与者获得的，而这种同意被记录在FO知情同意书 RM。知情同意过程的目的是提供足够的信息，以一个参与者，从而使一个明智的决定可能会在是否要报名参加学习，还是要继续参加该项。在这方面，知情同意文件必须具有良好的可读性和应该写在，可以很容易理解（ 第 6至第 8次级读电平）由目标人群的语言。胁迫或不当影响的可能性必须最小化，并且对象必须给予充分的时间来考虑参与。参与者也必须允许行使其在任何阶段研究的过程中没有点球时撤回同意的权利。自愿知情同意是一个强制性的先决条件的受试者参与研究并且还具有法律效力7。
按照规定进行保护人类受试者21 CFR 50.25（/45cfr46.html">http://www.hhs.gov/ohrp/humansubjects/guidance/45cfr46.html 8），研究参与者必须被告知的研究目的，参与这项研究的程序，替代品的参与，该研究所有可预见的风险和不适（不仅包括人身伤害，还可能出现的心理，社会或经济损害，不适或不便），福利社会，可能是为了个人，时间长度的主题，预计参加，联系人的问题的答案，或在研究相关的伤害或紧急情况下，声明，表示参与是自愿的，拒绝参加不会造成任何后果或利益损失，如在常规临床护理的妥协该参与者有权与其有关主体的权利，保密权和退出接收他/她的诊断结果，最后声明该研究在没有任何结果的任何时间。从与会者谁在研究的过程中撤回同意组织标本不应被存入银行，必须立即耗尽。的知情同意的一个或多个元件免除可从IRB获得一些可能实际上不可能没有改变完成到所需的元素或用于研究，其中所需的元素是不适用的研究项目。必须采取非常谨慎，以确保数据的保密性。健康保险流通与责任法案（HIPAA）是防止使用或披露“受保护的健康信息”（PHI）未经参与者书面同意的联邦法律。 PHI包括但不限于传输或维持在任何形式或媒介，并且包括可用于识别个人的9个字段的健康信息。
通过这项工作，我们的目标是勾勒必须Tissu酒店时，必须遵循协议ë处理 – 包括采购，并存储和强调以下这些严格的准则，以便尽量减少可能导致由于在提取的组织受到的应力的偏差的重要性。我们也将尽力提供下游分析或分析（ 图1）可以在这样的标本进行的简要介绍，使读者可以做出最适合他们需要什么样测定（S）合格的判断。
Protocol
Representative Results
Discussion
最终，处理的方法必须由所需的假说的支配和预期的技术测定，以进行（ 图1）。以下部分作为概述来描述可在这样的组织切片进行电位测定法。这决不是一个详尽的概述，但旨在帮助指导来样加工方法和选择下行测定所描述的技术，并列出他们的长处和短处。
流式细胞术染色可以执行上新鲜解剖组织切片，或片段存储的O / N的MACS缓冲液中于4℃。流式细胞仪便于…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这项工作是由约翰·G·玛丽和肯尼迪斯特拉纪念基金（批准＃0727033）和黑色素瘤研究联盟的慈善捐款支助。作者要感谢得克萨斯大学MD安德森癌症中心的机构组织库（ITB）的大学协调组织分布和收集，促进转化研究，以及伊格纳西奥Wistuba博士维克多·普列托博士的MD安德森癌症中心部病理学和黑色素瘤登月计划。最后，作者希望承认受黑色素瘤的患者和家庭。
Materials
| Needles | BD | 305167 | |
| Stainless steel disposable scalpels | Miltex | 4-410 | |
| Tissue culture dish | Corning | 353003 | |
| Biopsy Cassettes | Thermo Fisher | 58931 | |
| RNA-stabilizing solution | Ambion | AM7021 | |
| 1.5ml Eppendorf tubes | Phenix | MAX-815 | |
| 50ml tubes | Corning | 430290 | |
| 10% Neutral Buffered Formalin | StatLab Medical Products | 28600-5 | |
| Formalin Containers | Fisher Scientific | 23-032-059 | |
| Optimal cutting temperature solution (OCT) | Sakura Finetek | 4583 | |
| Tissue-Tek Cryomold | Sakura Finetek | 4557 | |
| Dnase I | Roche | 10104159001 | |
| Collagenase I | Roche | 11088793001 | |
| 70μm cell strainers | BD Bioscience | 352350 | |
| 96 well round bottom plates | Corning | 3799 | |
| Live/Dead stain solution | Life Technologies | L34957 |
Referenzen
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