Effiziente Isolation Protokoll für die B- und T-Lymphozyten von Menschengaumenmandeln

Farzaneh Assadian; Karl Sandström; Göran Laurell; Catharina Svensson; Göran Akusjärvi; Tanel Punga

doi:10.3791/53374

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Methodenartikel

Effiziente Isolation Protokoll für die B- und T-Lymphozyten von Menschengaumenmandeln

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DOI:

10.3791/53374

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16. November 2015

Farzaneh Assadian¹ , Karl Sandström² , Göran Laurell² , Catharina Svensson¹ , Göran Akusjärvi¹ , Tanel Punga¹

¹Department of Medical Biochemistry and Microbiology, Uppsala Biomedical Center, Uppsala University, ²Department of Surgical Sciences, Otolaryngology and Head & Neck Surgery, Akademiska sjukhuset

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Gaumenmandeln sind eine reichhaltige Quelle für B- und T-Lymphozyten. Hier bieten wir ein einfaches, effizientes und schnelles Protokoll zur Isolierung von B- und T-Lymphozyten aus menschlichen Gaumenmandeln. Die beschriebene Methode wurde speziell für Studien zur viralen Ätiologie der Mandelentzündung, der sogenannten Mandelentzündung, angepasst.

Zusammenfassung

Mandeln sind ein Teil des Immunsystems und bilden die erste Verteidigungslinie gegen eingeatmete Krankheitserreger. In der Regel bezieht sich der Begriff "Mandeln" auf die Gaumenmandeln, die sich an den Seitenwänden des Mundbereichs des Rachens befinden. Operativ entfernte Gaumenmandeln stellen eine leicht zugängliche Quelle für B- und T-Lymphozyten dar, um das Zusammenspiel zwischen fremden Krankheitserregern und dem Immunsystem des Wirts zu untersuchen. Dieses Videoprotokoll beschreibt die Dissektion und Aufbereitung von chirurgisch entfernten humanen Gaumenmandeln, gefolgt von der Isolierung der einzelnen B- und T-Zellpopulationen aus derselben Gewebeprobe. Wir stellen eine Methode vor, die tonsilläre B- und T-Lymphozyten mithilfe eines Antikörper-abhängigen Affinitätsprotokolls effizient trennt. Darüber hinaus verwenden wir die Methode, um zu zeigen, dass humane Adenoviren spezifisch die tonsilläre T-Zellfraktion infizieren. Das etablierte Protokoll ist allgemein anwendbar, um tonsillare B- und T-Zellpopulationen effizient und schnell zu isolieren und die Rolle verschiedener Arten von Krankheitserregern bei der tonsillären Immunantwort zu untersuchen.

Einleitung

Mandeln sind Ansammlungen von unvollständig verkapseltem lymphatischem Gewebe, das unter dem Epithel im oberen aero-digestive Trakt liegt und mit ihm in Kontakt steht. In der Regel bezieht sich der Begriff "Mandeln" auf die Gaumenmandeln, die sich an den Seitenwänden des Mundbereichs des Rachens befinden. Die paarigen Gaumenmandeln bilden zusammen mit der Nasen-Rachen-Mandel (Adenoid), den paarigen Eileitermandeln und den Zungenmandeln den sogenannten "Waldeyer-Ring". Letzteres ist für den Erstkontakt zwischen eingeatmeten oder verschluckten Krankheitserregern und dem lymphatischen Gewebe des aerodigestive Trakts verantwortlich^1,2. In der Tat haben zahlreic....