Stammzell-ähnlichen<em&gt; Xenopus</em&gt; Embryonale Explantate bis Früh Neurale Entwicklungs- Eigenschaften Studieren<em&gt; In-vitro-</em&gt; Und<em&gt; In-vivo-</em

Beatrice C. Durand

doi:10.3791/53474

Ein Abonnement von JoVE ist erforderlich, um diesen Inhalt anzuzeigen. Melden Sie sich an oder beginnen Sie noch heute mit einer kostenlosen Testphase.

Methodenartikel

Stammzell-ähnlichen

7.8K Aufrufe

⸱

DOI:

10.3791/53474

⸱

2. Februar 2016

Beatrice C. Durand¹^,²^,³^,⁴

¹Institut Curie, ²UMR 3387, CNRS, ³PSL Research University, ⁴Université Paris-Sud

In diesem Artikel

Zusammenfassung

In Xenopus-Embryonen sind Zellen aus dem Dach des Blastocoels pluripotent und können so programmiert werden, dass sie verschiedene Gewebe erzeugen. Hier beschreiben wir Protokolle zur Verwendung von amphibischen Blastocoel-Dachexplantaten als Assay-System, um in vivo und in vitro wichtige Merkmale der frühen neuronalen Entwicklung zu untersuchen.

Zusammenfassung

Das Verständnis der genetischen Programme, die der neuronalen Entwicklung zugrunde liegen, ist ein wichtiges Ziel der Entwicklungs- und Stammzellbiologie. In der amphibischen Blastula sind Zellen aus dem Dach des Blastocoels pluripotent. Diese Zellen können isoliert und so programmiert werden, dass sie durch Manipulation der Genexpression oder Induktion durch Morphogene verschiedene Gewebe erzeugen. In diesem Manuskript werden Protokolle für die Verwendung von Xenopus laevis Blastocoel-Dachexplantaten als Assay-System zur Untersuchung wichtiger in vivo und in vitro Merkmale der frühen neuronalen Entwicklung beschrieben. Diese Protokolle ermöglichen die Untersuchung des Schicksalserwerbs, des Zellmigrationsverhaltens sowie der zellautonomen und nicht-autonomen Eigenschaften. Die Blastocoel-Dachexplantate können in einem serumfreien, definierten Medium kultiviert und in Wirtsembryonen transplantiert werden. Diese Transplantation in einen Embryo ermöglicht die Untersuchung der langfristigen Abstammungsbindung, der induktiven Eigenschaften und des Verhaltens der transplantierten Zellen in vivo. Diese Assays können genutzt werden, um molekulare Mechanismen, zelluläre Prozesse und genregulatorische Netzwerke zu untersuchen, die der neuronalen Entwicklung zugrunde liegen. Im Rahmen der regenerativen Medizin bieten diese Assays die Möglichkeit, neuronale Zelltypen in vitro zu erzeugen, die im Wirkstoffscreening eingesetzt werden könnten.

Einleitung

Wirbelnervensystem geht aus dem neuronalen Platte als homogene Schicht von Neuroepithelzellen. Zu verstehen, wie Entwicklungsprogramme werden induziert, codiert, und gründete während Regionalisierung der Neuralplatte ist gegenwärtig eines der Hauptziele in der Entwicklungsbiologie. Im Vergleich zu anderen Systemen ist die experimentell zugänglich Xenopus Embryo ein Modell der Wahl für die Analyse von frühen Schritte der neuralen Entwicklung ^1,2. Es ist leicht, eine große Zahl von Embryonen zu erhalten, und externe Entwicklung ermöglicht den Zugang zu den ersten Schritten der Neurulation ^3. Viele Werkzeuge zur Verfügung, um experimentell....